[发明专利]一种样品菌株鉴定方法在审
| 申请号： | 202210032212.2 | 申请日： | 2022-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN114350750A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 朱海华;王晓瑞;王鋆坦;刘红伟;张梦雪;郭碧珊;王法云;王永 | 申请（专利权）人： | 河南省商业科学研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/689 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司 11570 | 代理人： | 田灵菲 |
| 地址： | 450002*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 样品 菌株 鉴定 方法 | ||
1.一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：基因组DNA提取，首先取1.5mL的离心管，向其中加入200μL预处理液和三颗研磨珠，然后加入菌样品，放入研磨仪中研磨充分备用；
S2：混合，把研磨后的原料收集起来，然后放置混合罐中，向混合罐中加入20μLProteinase K溶液，混合均匀；
S3：加入裂解液，向混合罐中加入200μL裂解液，充分混合均匀；
S4：加入无水乙醇，向混合罐中加入200μL无水乙醇，充分混合均匀，然后进行离心处理；
S5：清洗，离心后的物料通过吸附柱，用洗涤液和漂洗液进行清洗；
S6：干燥，把吸附柱在室温中放置5-10min；
S7：分析，采用HPLC分析法进行分析，然后使用纸层析法检测样品中是否有目标菌株，如果检测时检测有目标菌株，则进行下一步，否则再次培养；
S8：扩增，把收集到的溶液放入培养基上进行扩增处理；
S9：纯化，采用组织分离法，对培养的菌株进行挑选纯化1-4次，纯化后放置在检测盒中备用；
S10：检测，对分离纯化后得到的菌株通过rDNA ITS序列进行鉴定、比对，比对通过的菌株通过测序仪进行检测。
2.根据权利要求1所述的一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，所述S2中混合时进行颠倒混匀，然后在37℃下放置30-60min。
3.根据权利要求1所述的一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，所述S3中混合时进行颠倒混匀，然后在70℃下放置10min。
4.根据权利要求3所述的一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，所述S4中进行离心处理时离心机的转速为10000-15000r/min。
5.根据权利要求1所述的一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，所述S5中用洗涤液洗涤1-2次，漂洗液漂洗1-3次。
6.根据权利要求1所述的一种样品菌株鉴定方法，其特征在于，所述S8中培养基成分为葡萄糖15-25g，琼脂10-15g，水100-300ml，大豆胨1-8g。
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