[发明专利]一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用

权利要求书

1.一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对，所述分子标记引物对包括PSY2A-1F和PSY2A-1R的组合，或PSY2A-2F和PSY2A-2R的组合；

所述PSY2A-1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述PSY2A-1R的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；

所述PSY2A-2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述PSY2A-2R的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述分子标记引物对，其特征在于，所述果肉颜色包括黄色和白色。

3.一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1或2所述分子标记引物对和PCR扩增试剂。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括PCRMix。

5.一种鉴定枇杷种质的果肉颜色的方法，其特征在于，包括以下步骤：以枇杷种质的基因组DNA为模板，与权利要求1或2所述分子标记引物对或权利要求3或4所述试剂盒中的分子标记引物对配制PCR反应体系，进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行基因分型；

当PCR扩增产物显示为300～400bp长度的一条带时，为白色果肉；当PCR扩增产物显示为＞500bp长度的一条带时，为黄色果肉；当PCR扩增产物显示为300～400bp和＞500bp两条带时，为黄色果肉。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述基因组DNA来源于枇杷种质的嫩叶或茎尖。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR反应体系以25μL计，包括：1.0μL模板，12.5μL 2×PCR Mix，1.0μL 10μM的F引物，1.0μL10μM的R引物和余量的ddH₂O。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：4℃预变性4min；95℃变性1min，55℃退火45s，72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸10min。

9.根据权利要求5所述方法，其特征在于，使用1％的琼脂糖凝胶电泳和/或8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳对所述PCR扩增产物进行基因分型。

10.权利要求1或2所述分子标记引物对或权利要求3或4所述试剂盒在分子标记辅助培育目标颜色果肉枇杷种质中的应用。