[发明专利]一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物和方法

说明书

本发明属于脑膜炎奈瑟菌检测技术领域，尤其涉及一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物和方法。所述引物包括第一引物，所述第一引物包括：交叉内引物对、置换引物对和三组扩增引物对；其核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：10所示，将本申请引物进行MCDA扩增，对原始核酸序列起到指数级别的放大作用，提高检测精度，缩短检测时间。

技术领域

本发明属于脑膜炎奈瑟菌检测技术领域，尤其涉及一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物和方法。

背景技术

脑膜炎奈瑟菌，是流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原菌。肾形或豆形革兰阴性双球菌，两菌接触面平坦或略向内陷，直径0.6～0.8μm。人工培养后可成卵圆形或球状，排列较不规则，单个、成双或4个相连等。在孵育24h后的培养物中，常呈现衰退形态，菌体大小较不一致，着色亦深浅不匀。在患者脑脊液中，多位于中性粒细胞内，形态典型。

流行性脑脊髓膜炎，是一种由脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)感染引起的以脑膜炎和败血症为主要临床表现的急性呼吸道传染病。即使患者在发病24-48小时内获得治疗，流脑的病死率仍然高达5％-10％，并且约10％-20％的幸存者会遗留精神异常及截肢等明显的后遗症。根据细菌的荚膜多糖结构，脑膜炎奈瑟菌可分为12个血清群，A、B、C、W135、X、Y群是目前发现引起全球流脑流行的六种主要致病血清群。据我国近几年的流脑监测资料显示，我国目前脑膜炎奈瑟菌的流行以A、B、C、W135群为主要优势菌群，偶尔出现X群和Y群脑膜炎奈瑟菌感染病例的报道。该菌以人类为其唯一的已知宿主，寄生在鼻咽部，通过呼吸道飞沫传播或者通过口腔分泌物接触传播。荟萃分析显示我国脑膜炎奈瑟菌的总体带菌率为2.7％。虽然仅部分携带者会出现临床症状，但无症状的带菌者被认为是流脑的主要传染源。因此，做好脑膜炎奈瑟菌及其血清群检测和鉴定的技术储备工作十分必要。

流脑发病急、进程快及病死率高与该病难以早期诊断有关。因此对于已经感染脑膜炎奈瑟菌或流脑发病的患者，尽快诊断并开始抗生素治疗是关键。

目前，临床上对脑膜炎奈瑟菌的血清学分群是在流脑确诊基础上，通过血清玻片凝集法对脑膜炎奈瑟菌进行血清群鉴定。此方法不仅需要培养出纯菌，费时费力，还因易受其他非特异因素的影响，导致检出率低，漏检率高，常延误诊断，耽误对患者病情的治疗及对流脑流行的有效控制。因此，建立快速、精准鉴定脑膜炎奈瑟菌及其血清群的分子检测方法，是及时有效诊断、控制与预防流脑传播的重要手段，对于流脑防治非常必要。

随着核酸诊断技术的快速发展，国内外已有部分实验室将以PCR为基础的检测技术，如普通PCR、荧光PCR等，用于快速鉴定脑膜炎奈瑟菌及其血清群。这些PCR方法与传统方法相比具有敏感性强、特异性高、快速等优点，但因依赖于特殊而昂贵的仪器设备、熟练地操作人员及后续的电泳操作，对于基层单位或条件落后的实验室难以推广，在一定程度上限制了这些技术的广泛应用。因此还需探讨更加便捷的方法，应对流脑暴发或流行。

近年发展起来的多种恒温扩增技术，较PCR技术而言，不依赖于热循环扩增设备，反应速度快，敏感性好。因此，有利于实现快速扩增，便捷检测及现场诊断。到目前为止，应用较为广泛的恒温扩增技术有滚环扩增(RCA)、链置换扩增(SDA)、解旋酶依赖的恒温扩增(HDA)、环介导恒温扩增(LAMP)、交叉扩增(CPA)及多交叉置换扩增(MCDA)等。

发明内容

本申请提供了一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物和方法，以解决现有检测脑膜炎奈瑟菌精度低的技术问题。

第一方面，本申请提供了一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物，所述引物包括第一引物，所述第一引物包括：如核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的置换引物F1和如核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的置换引物F2；

如核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的交叉内引物CP1和如核苷酸序列如SEQ IDNO：4所示的交叉内引物CP2；