[发明专利]抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU-NP-A3及其在检测中的应用

说明书

本发明提供抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU‑NP‑A3及其在检测中的应用。一种抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体，能识别H3N2流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG2a、κ型，命名为ZJU‑NP‑A3，能特异性识别流感病毒的核蛋白。抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。对该单克隆抗体进行进一步的理化性状分析和鉴定，并建立了该单克隆抗体通过免疫荧光实验检测流感病毒核蛋白的方法。本发明为临床H3N2流感病毒感染的辅助诊断提供了有效工具，并可推广应用于多种检测技术以及临床和实验研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗核蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗核蛋白的单克隆抗体ZJU-NP-A3，鉴定为IgG2a、κ型，再通过亲和纯化、免疫等技术实现对该抗体的应用。

背景技术

流行性感冒病毒由于其超强的传染性和变异性成为第一个实行全球监测的疾病。1968年，H3N2流感病毒引发了全球的大流行,此后该病毒一直在人群中呈季节性的流行并不断发生着变异，自1999年至2016年，世界卫生组织(World Health Organization,WHO)公布的流感疫苗组分中H3N2毒株更新了10次，正是这种不断突变特点，导致了疫苗株与流行株不匹配，给防控策略的制定带来了巨大困扰。因此，快速准确的诊断对降低病死率至关重要。而早期治疗成为关键，在症状出现超过5天后才开始抗病毒治疗时，死亡风险增加。

对于甲型流感病毒不同亚型的检测，目前已有多种方法，基于检测标靶物的不同，这些方法又分为病毒分离检测，抗原、抗体检测等。但是上述方法都需要特殊设备和条件，对于某些条件落后的地区并不适合。因而开发一种快速、灵敏的H3N2病毒检测产品势在必行，能促进更早更广泛的发现H3N2病毒感染，减少重症病例发生，降低病死率。

综上所述，开发H3N2流感病毒单克隆抗体，用于快速灵敏检测方法的建立是十分有意义的。基于以上背景，本项目选定核蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该单克隆抗体的成功获得，为建立新型的H3N2流感病毒病诊断方法——基于免疫学技术的诊断奠定物质基础。同时对疾病发病机理、预后及疗效判定等方面的研究起到重要作用。

本发明用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体，能识别H3N2流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG2a、κ型，命名为ZJU-NP-A3，能特异性识别流感病毒的核蛋白。

SEQ ID No.1

Heavy chain:DNA sequence(360bp)

Signal sequence-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4

CAGATCCAGTTGGCGCAGTCTGGACCTGAACTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAGGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTCACATCTGCTGGAATACAGTGGGTGCAAAAGATGCCAGGAAAGGGTTTGAAGTGGATTGGCTGGATAAACACCCACTCTGAATTGCCAAAATATGCAGAAGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCATATTTACAGATAAGCAACCTCAAAAATGAAGACACGGCTACGTTTTTCTGTGCGAGAAACTTTGGTAACTACCCCTATGCTATGGACTTCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA