[发明专利]马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法。本发明所提供的马拉色菌检测引物组及试剂盒，结合了RPA高效扩增与CRISPR/Cas检测技术的特异靶向性优势，具有扩增效率高、特异性强、操作简单等特点，与念珠菌、霉菌、孢子丝菌等其他常见致病性真菌及人类基因组DNA均无交叉反应。本发明提供的试剂盒所有检测步骤不依赖温度变化、无需昂贵PCR仪或复杂的变温条件，因此反应速度更快、成本更低。本发明提供的试剂盒可直接用于检测临床病原性真菌样本，无需培养，满足临床早期快速精准诊断需求，同时有助于快速鉴定常规形态学或组织病理学难以鉴别的菌株。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，特别涉及一种马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法。

背景技术

马拉色菌相关疾病（The Malassezia Genus in Skin and Systemic Diseases）是一组由常见真菌感染引起的疾病，如：花斑糠疹（pityriasis versicolor）、马拉色菌毛囊炎（Malassezia folliculitis）、脂溢性皮炎（seborrheic dermatitis）、特应性皮炎（Atopic dermatitis）、银屑病（Psoriasis）等均与马拉色菌有着密切关联。上述疾病不仅仅危害各年龄层人群的身心健康，在各级医院中易出现误诊，为患者、社会及国家医保带来巨大的经济负担。以特应性皮炎、银屑病为例，据美国国家疾病控制中心公布数据，特应性皮炎平均自然人群患病率为10%，仅2015年美国特应性皮炎诊治成本保守估计为52.97亿美元。银屑病是一种常见慢性皮肤病，自然人群患病率约为3%，约有740万成年人患有银屑病，该疾病每年诊治费用支出估计为352亿美元。因此，马拉色菌相关疾病的防控关系着国家的公共卫生安全，早期快速、精准鉴定马拉色菌是及时诊断治疗马拉色菌感染疾病的关键。

目前真菌感染性疾病的诊断主要依赖于对致病病原体的实验室检验，传统实验室诊断方法有：真菌显微镜检（KOH法、荧光染色法）、真菌分离培养、组织病理检查。其中，真菌分离培养及组织病理检查作为诊断真菌感染性疾病的金标准，同样适用于马拉色菌感染，但真菌分离培养往往有着鉴定周期长、阳性率低及形态学鉴定难度高等缺点；因此，如何实现更加快速、简便、准确的检测，是致病病原体检测的未来发展方向。

发明内容

本发明目的在于提供一种马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。

本发明的第一方面在于提供了crRNA。所述crRNA包括靠近5’端的锚定序列片段和靠近3’端的向导序列片段，所述向导序列片段的核苷酸序列如表1所示：

表1 crRNA的向导序列

所述向导序列片段与马拉色菌的ITS序列特异性结合，能够准确实现糠秕马拉色菌（Malassezia furfur）、钝形马拉色菌(Malassezia obtusa)、球形马拉色菌（Malasseziaglobosa）、合轴马拉色菌（Malassezia sympodialis）、厚皮马拉色菌（Malasseziapachydermatis）这五种不同种类的常见马拉色菌的识别鉴定。

进一步，所述锚定序列片段的核苷酸序列为5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAU-3’（ SEQID NO.11）。即具体的crRNA的序列如表2所示：

表2 crRNA的序列