[发明专利]一种苯二氮卓类新型毒品在线固相微萃取高效液相色谱联用检测方法

权利要求书

1.一种苯二氮卓类新型毒品在线固相微萃取高效液相色谱联用检测方法，其特征在于：所述的检测方法是以共价有机框架表面功能化整体柱作为固相微萃取整体柱，结合管内固相微萃取-高效液相色谱在线联用系统，建立的苯二氮卓类新型毒品的在线固相微萃取高效液相色谱联用检测方法；

所述的共价有机框架表面功能化整体柱是以聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱作为基质整体柱，使用碱性对苯二胺溶液作为功能化试剂对其表面进行聚对苯二胺纤维功能化；再将亚胺型共价有机框架的反应液与乙酸水溶液的混合液注满整体柱，以聚对苯二胺纤维作为结合位点，在整体柱表面原位生成共价有机框架微球，制得共价有机框架表面功能化整体柱；

所述的苯二氮卓类新型毒品包括硝西泮，艾司唑仑，奥沙西泮，三唑仑，地西泮和氟硝西泮；

所述的共价有机框架表面功能化固相微萃取整体柱的制备方法包括以下步骤：

1）聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯）基质整体柱的制备：先将长度为33毫米，内径为2.1毫米的不锈钢空柱用甲醇冲洗20分钟，放入60℃烘箱烘干待用；基质整体柱的制备填料由300 mg甲基丙烯酸缩水甘油酯、100 mg乙二醇二甲基丙烯酸酯、480mg 1,4-丁二醇、120 mg N,N-二甲基甲酰胺与1.2 mg偶氮二异丁腈组成，用旋涡混合器混匀后，超声15分钟；用注射器将配好的填料注入前述的不锈钢柱中，放入60℃水浴反应24小时；反应结束后，以甲醇为流动相，用液相色谱泵冲洗不锈钢柱约1小时，以去除床层内残留的致孔剂、未反应的单体以及反应生成的一些低聚物，即得到聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯）基质整体柱；

2）聚对苯二胺纤维表面功能化：取2.1628 g对苯二胺与0.4 g氢氧化钠加入20 mL甲醇，用漩涡混合器震荡均匀，超声20分钟，得到1 mol/L碱性对苯二胺甲醇溶液，并将该溶液通过微量注射泵注入聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯-co-乙二醇二甲基丙烯酸酯）基质整体柱中，注满密封后，常温反应24小时；反应结束后，先以甲醇为流动相，用液相色谱泵冲洗不锈钢柱1小时，再将流动相换成乙腈冲洗1小时，即完成基质整体柱的聚对苯二胺纤维表面功能化；

3）共价有机框架表面功能化固相萃取整体柱的制备：取14.06 mg的1,3,5-三(4-氨苯基)苯与11.17 mg的2,5-二乙烯基-1,4-苯二甲醛，加入至5mL乙腈配置成共价有机框架反应液；再将共价有机框架反应液、12 mol/L乙酸水溶液与完成表面功能化的基质整体柱分别放入冰箱在4℃下预冷2小时，接着取1.0 mL共价有机框架反应液，加入60 μL 12 mol/L乙酸水溶液，震荡混匀，用微量注射泵将其注入完成表面功能化的基质整体柱中，注满密封后，放入60℃水浴反应；1小时后将柱子取出自然冷却10分钟，按前述的方法从反方向再次注入共价有机框架反应液与乙酸水溶液的混合液，注满密封后，再次放入60℃水浴反应；重复上述操作3次；最后一次注入完毕后，将不锈钢柱置于60℃水浴中反应12小时，使其充分反应；反应结束后，以乙腈为流动相，用液相色谱泵冲洗不锈钢柱2小时，即得到共价有机框架表面功能化整体柱；

所述的管内固相微萃取-高效液相色谱联用系统由六通阀V1、六通阀V2、液相色谱输液泵A、液相色谱输液泵B、0 .5 mL定量环、共价有机框架表面功能化固相微萃取整体柱、C18色谱分析柱、二极管阵列检测器组成；

所述的在线固相微萃取高效液相色谱联用检测具体操作步骤如下：

平衡：首先，六通阀V1和V2都在LOAD位置；装载液通过泵A平衡共价有机骨架表面功能化固相微萃取整体柱，流速为0.05 mL/min；流动相通过泵B直接经分析柱以获得色谱分离需要的稳定基线，流速为1.0 mL/min；同时，通过进样针将样品溶液注满定量环；

在线富集萃取：当六通阀V1调至INJECT位置，固相微萃取开始，定量环中的样品经由装载液带入固相微萃取整体柱，经过10分钟，六通阀V1调回LOAD位置，装载液继续冲洗固相微萃取整体柱90 秒以消除残留的样品溶液，降低其干扰；

在线洗脱：先将泵B流动相流速调整为0.1 mL/min，再将六通阀V2调节至INJECT位置，利用流动相将固相微萃取整体柱上富集的分析对象洗脱到分析柱前端，洗脱时间为150秒；

检测：洗脱完成时，将六通阀V2调节LOAD位置；同时设置泵B流动相流速为1.0 mL/min，通过分析柱将洗脱下来的分析对象进行分离，再利用检测器进行检测；

所述的装载液组成为：按体积分数比计，乙腈/水=90%/10%；所述的流动相组成为：按体积分数比计，乙腈/1%三氟乙酸水溶液=60%/40%；所述的分析柱为C18分析柱；检测波长：229nm；柱温：40℃。