[发明专利]一种基于空气中DNA的植物病菌检测方法

权利要求书

1.一种基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在环境中采集样本；(2)在采集的样本中提取空气中的DNA；(3)使用特异性引物检测植物病菌DNA并进行PCR扩增；(4)记录采样的高度，采样时的风速，建立一个植物病菌DNA含量检测模型。

2.根据权利要求1所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，植物病菌包括稻瘟病菌、玉米小斑病菌、水稻纹枯病菌。

3.根据权利要求1所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，步骤(2)中包括过滤气体样品、CTAB法提取DNA。

4.根据权利要求3所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，所述过滤气体样品具体步骤为：将压力过滤器指向样本，收集、过滤指定流速和时间下的稻瘟病菌的气体样品。

5.根据权利要求3所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，所述CTAB法提取DNA具体为：

(a1)用注射器注射3ml的CTAB到压力过滤器中，吸打混匀；

(a2)将步骤(a1)得到的CTAB Buffer平均分装进1.5ml离心管中，每管500ul左右；

(a3)离心管放入水浴锅加热；

(a4)加入500ul苯酚、氯仿和异丙醇的混合溶剂，震荡混合均匀，静止5min；

(a5)离心；

(a6)为增加提取的DNA含量，吸取步骤(a5)中离心后的上清重复步骤(a4)和(a5)；

(a7)在新的离心管中加入500ul异丙醇，加入步骤(a6)中的上清，放入-70℃温度下超过1h；

(a8)离心步骤(a7)中的混合液；

(a9)加入1ml的乙醇，震荡后离心；

(a10)倒出乙醇，速离，吸去管内残留的乙醇；

(a11)超净台吹沉淀至透明，加ddH₂O，震荡混匀。

6.根据权利要求5所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，步骤(a3)中水浴锅温度为65℃；加热时间为15min。

7.根据权利要求5所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，离心速度均为13000转/分钟；其中步骤(a5)离心时间为10分钟；步骤(a8)离心时间为15min；步骤(a9)离心时间为10分钟。

8.根据权利要求5所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，苯酚:氯仿:异丙醇的体积比为：24:25:1。

9.根据权利要求5所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，步骤(a9)中乙醇的浓度为75％。

10.根据权利要求1所述的基于空气中DNA的植物病菌检测方法，其特征在于，步骤(3)具体为：

(b1)使用特异性引物检测植物病菌DNA；

(b2)扩增条件为95℃作用15min，然后将以下步骤循环40次：95℃作用15s，55℃作用15s，72℃作用50s，72℃持续5min后，12℃进行保持；

(b3)跑胶鉴定PCR结果。