[发明专利]用于培养类器官的样本保存液

说明书

本发明公开了一种用于培养类器官的样本保存液。优化保存液的各组分比例，能够提高动物性生物样本的活性，为后续的类器官的培养提供了具有优良生物活性的材料，进而提高培养成功率。为类器官培养提供了高效的材料奠定了基础。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体的涉及一种用于培养类器官的样本保存液，经过保存，能够明显提高类器官的培养成功率。

背景技术

生物样本离体后因为失去原有体内环境的支持而发生凋亡，细胞活性快速降低，从而影响了后续各种对细胞活性要求高的检测和细胞培养扩增。现有的生物样本活性保存液大多都是针对细胞内核酸和蛋白质的保存，很少有比较高效的保存较大组织样本细胞整体活性的保存液。

临床科学研究中往往要获取病人样本进行较多的涉及细胞活性的检测和研究，特别是对于目前比较前沿的类器官研究，离体样本的活性直接可以决定后续培养的成功与否。临床目前普遍采取生理盐水，中性磷酸盐溶液(PBS)或者含血清培养基4℃低温保存样本，这种方法一般在2小时内能比较好的保存细胞活性，但超过2小时，样本细胞的活性又明显下降；超过6小时的生物样本能成功进行细胞培养或类器官培养的只有原有的1/3。同时对于临床活检或穿刺的微小样本，这种保存方法几乎无法保证样本的活性，类器官培养有超过 80％的失败率。

类器官培养技术作为2017年Nature Method评选的年度生命科学技术，已经受到国内国外的高度关注。2021年2月国家药监局和卫健委在《基因修饰细胞治疗产品非临床研究和评价技术指导原则》中提到类器官作为有效性和安全性补充。因此类器官培养将会被越来越多的研究机构和研究人员采用，但是在具体的类器官培养过程中，由于生物样本的活性问题导致了较多的类器官培养失败。高效稳定长时间保持样本活性的样本保存液，对整个类器官研究和国家产业发展来说至关重要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于培养类器官的样本保存液，进而提高样本经培养转变为类器官的成功率。

为解决上述技术问题，本发明提供一种用于培养类器官的样本保存液，所述培养基成分包括如下成分：

Advance DMEM/F12、抗坏血酸、全转铁蛋白、L-谷胱甘肽、胰岛素、偏钒酸铵、四水氯化锰、亚硒酸钠，乙醇胺盐酸盐。

优选的，所述培养基中所述抗坏血酸浓度为0.1-1mg/L。

优选的，所述培养基中所述全转铁蛋白浓度为1-20mg/L。

优选的，所述培养基中所述L-谷胱甘肽浓度为0.1-1mg/L。

优选的，所述培养基中所述胰岛素浓度为0.1-5mg/L。

优选的，所述培养基中所述偏钒酸铵浓度为1×10^-4-20×10^-4mg/L。

优选的，所述培养基中所述四水氯化锰浓度为5×10^-5-5×10^-4mg/L。

优选的，所述培养基中所述N-乙酰胱氨酸浓度为0.1-10mM。

优选的，所述培养基中所述乙醇胺盐酸盐浓度为1-10mg/L。

优选的，所述培养基中所述亚硒酸钠浓度为0.001-0.05mg/L。

优选的，所述培养基中还包括N2(0.1-1.5×)，B27(0.1-1.5×)，Gluta MAXSupplement(0.1-2×)，HEPES(0.1-2×)，Normocin^TM(0.1-2×)组分。

优选的，所述培养基中还包括EGF，进一步优选的，所述EGF浓度为1- 200ng/ml。