[发明专利]一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针，其特征在于：所述荧光探针分子式为C₄₈H₅₀IN₂O₅，其结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、制备中间体ICy-OMe：将0.2mL哌啶、摩尔比为1：1的中间体3和中间体5溶于10mL乙酸酐中制备混合溶液的体积摩尔浓度为0.1-1.0mol/L，并在80℃条件下搅拌2小时，反应结束后将反应液倒入100g冰中，随后用二氯甲烷萃取，将萃取液用无水硫酸钠干燥，减压旋干脱除溶剂，柱层析进一步纯化，用洗脱剂洗脱后得到中间体ICy-OMe；

S2、制备中间体ICy-OH：将中间体ICy-OMe溶解于二氯甲烷中，然后缓慢滴入三溴化硼，在氩气保护下，反应混合物在50℃下搅拌4小时，随后让反应液冷却至室温，并缓慢加入甲醇淬灭反应，在真空下去除溶剂后，收集残渣，用水冲洗，并在真空中干燥，得到中间体ICy-OH；

S3、制备目标产物ICy-Q：将摩尔比为1:2的中间体ICy-OH、N,N二异丙基乙胺的混合物溶于无水乙腈中制备的混合溶液的体积摩尔浓度为0.1-1.0mol/L，氩气保护下，55℃搅拌0.5小时，随后加入中间体2，并继续在氩气保护下55℃搅拌5小时，反应结束后，减压旋干，柱层析进一步纯化，用洗脱剂洗脱后得到目标产物ICy-Q；

其中，中间体2的结构式为：

其中，中间体3的结构式为

其中，中间体5的结构式为

其中ICy-OMe的结构式为

其中ICy-OH的结构式为

其中ICy-Q的结构式为

3.根据权利要求2所述的一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针的制备方法，其特征在于：所述中间体2的制备方法包括如下步骤：

A1、制备中间体1：将摩尔比为1:1.4的4-甲氨基苯甲酸和CDI混合物溶于四氢呋喃中制备的混合溶液的体积摩尔浓度为0.1-1.0mol/L，25度搅拌1小时，随后向反应液加入水并搅拌，同时缓慢加入硼氢化钠，并继续搅拌2小时，反应结束后用稀盐酸中和反应液，并用乙酸乙酯萃取。将萃取液用无水硫酸钠干燥，减压旋干，柱层析进一步纯化，用洗脱剂洗脱后得到中间体1。

A2、制备中间体2：将摩尔比为1：3的化合物Q、甲基吗啡啉溶于二氯甲烷中，将混合液冷却，并缓慢滴加氯甲酸异丁酯，并继续搅拌30分钟，随后添加含有中间体1的二氯甲烷溶液，并继续搅拌5小时，反应结束后将反应液减压去除溶剂，并重新用乙酸乙酯溶解，并依次用水，稀盐酸和碳酸氢钠饱和溶液洗涤，最后用无水硫酸钠干燥并减压去除溶剂；

将的到的产物(T-OH)和NBS混合物溶于5mL二氯甲烷中，再加入DMTU，室温搅拌2小时，反应完毕混合溶液用二氯甲烷稀释，然后用水洗涤三次，接着将二氯甲烷用无水硫酸钠干燥，最后将溶剂减压旋干，并使用洗脱液通过硅胶快速色谱纯化，以获得黄色的中间体2；

其中，结构式CDI的结构式为

其中，中间体1的结构式为

其中，化合物Q的结构式为

其中，结构式T-OH的结构式为

4.根据权利要求3所述的一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针的制备方法，其特征在于：所述中间体5的制备方法包括如下步骤：

将摩尔比为1：5的中间体4和碘甲烷溶于乙腈中以制备混合溶液，该混合溶液的体积摩尔浓度为0.1-1.5mol/L，将混合溶液在80℃条件下回流搅拌7小时，随后冷却至室温，通过过滤收集沉淀物，用乙醚洗涤，并在真空中干燥，得到中间体5；

其中，中间体4的结构式为

5.根据权利要求4所述的一种特异性识别NQO-1的花菁类荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤A2中，所述T-OH，NBS和DMTU混合物的摩尔比为1:1.5:0.45。