[发明专利]一种基于多聚赖氨酸大分子（DGL）结构的酶标二抗制备及其方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，且公开了一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，包括以下步骤：S1、目标分子骨架的选择：选取多聚赖氨酸大分子DGL(D1‑D3)；S2、目标结合酶的选择：选择辣根过氧化氢酶(HRP)；S3、目标结合IgG抗体的选择：选择山羊抗兔免疫球蛋白IgG作为目标抗体；本发明制备的“HRP‑多聚赖氨酸大分子(DGL)‑IgG”聚合物的灵敏度，明显好于现有市场国产品牌，并且SD‑PolyHRP二抗采用了最新的制备工艺，分子充分活化，避免有毒试剂的使用，利于环保要求；树枝状骨架结构、小分子IgG抗体(特异性含有Fab段肽链)，解决了传统聚合物空间位阻大、灵敏度不高、非特异性染色的问题。创造性的采用多聚赖氨酸大分子(DGL)作为骨架。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体为一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法。

背景技术

目前国内科研机构以及临床诊断机构所使用的免疫组化即用型二抗检测系统主要有两种，一种是通过卵白素－生物素或者链霉素－生物素之间的高亲和力而对检测信号进行放大的二抗检测系统(生物素检测系统)；另一种是通过在聚合物上耦联多个抗体和酶的方式而对信号进行放大的二抗检测系统(“酶－聚合物—抗体”检测系统)。生物素检测系统有时会受到待测组织的内源性生物素的干扰而产生假阳性结果，从而会影响结果的准确性，因此此种二抗检测系统在国内的应用逐渐在减少，特别是在临床辅助诊断的应用日益减少；“酶－聚合物—抗体”检测系统，不会受到待测组织内源性生物素的干扰，染色背景低，操作步骤及时间较少，集准确、方便、快捷的优点于一身，因此其在临床辅助诊断中的应用也越来越广泛。目前国内使用的“酶－聚合物—抗体”检测系统(二抗)大多依赖进口，价格昂贵、使用成本高，市场上迫切需要国产高质量的“酶－聚合物—抗体”检测系统。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，解决了上述背景技术中所存在的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，包括以下步骤：

S1、目标分子骨架的选择：选取多聚赖氨酸大分子DGL(D1-D3)；

S2、目标结合酶的选择：选择辣根过氧化氢酶(HRP)；

S3、目标结合IgG抗体的选择：选择山羊抗兔免疫球蛋白IgG作为目标抗体；

S4、检测系统(SD-PolyHRP)：多聚赖氨酸大分子(DGL)上的-NH₂官能团与辣根过氧化物酶(HRP)、IgG上-COOH官能团进行酰胺化反映，使蛋白分子紧密结合在多聚赖氨酸大分子(DGL)骨架结构上，增加单位体积蛋白的浓度；

S5、试验过程：

S51、选用辣根过氧化物酶HRP 3.5g溶解到8ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，添加二苯基亚砜溶液0.4ml于10℃低温低速搅拌1.5h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩至5ml试管中，2-8℃冷藏备用；

S52、取0.4g的多聚赖氨酸大分子(DGL)溶于6ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，将该溶液和步骤S51液体进行混合，于10℃低温下孵育反应20h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩，取其浓缩液装于5ml试管中，2-8℃冷藏备用；