[发明专利]生物微区实时温度检测方法

权利要求书

1.一种生物微区实时温度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将上转换纳米探针与待测样品按照质量体积比为1mg：1ml混合均匀，共同孵育6 h后，用PBS清洗后，使用波长为808 nm的近红外激光照射；所述近红外激光的功率密度小于或等于100 mW/cm²；

（2）近红外激光对待测样品内的所述上转换纳米探针进行聚焦扫描激发，使其产生520nm和545 nm的可见光；

（3）根据产生的520 nm和545 nm的可见光的强度信息，计算出520 nm和545 nm的两路光强比率，并通过所述光强比率的数值和所述上转换纳米探针的比率-温度标准曲线比较获得各聚焦扫描点的微区温度数据；

其中的上转换纳米探针的化学式为NaYF₄：Yb/Er/Nd@IR806@DSPE-PEG；其中，上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd中的Y、Yb、Er和Nd元素的摩尔比为78：20：1：1。

2.根据权利要求1所述的生物微区实时温度检测方法，其特征在于：所述上转换纳米探针的合成方法包括以下步骤：

S1：合成上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd；

S2：将所述上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd与IR806染料在CHCl₃中混合，超声1小时后离心，弃上清后重悬于水溶液中，并加入DSPE-PEG超声30分钟，离心弃上清并用生理PBS重悬后，得所述上转换纳米探针。

3.根据权利要求2所述的生物微区实时温度检测方法，其特征在于：在所述S1中，通过以下步骤合成所述上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd：

将NaOH水溶液、乙醇和油酸在室温下充分混合至澄清后，将Y、Yb、Er和Nd元素的乙酸盐按照Y、Yb、Er和Nd元素的摩尔比为78：20：1：1加入上述澄清液并搅拌均匀；接着加入NaF乙醇溶液后，190℃水热反应24 h，离心获得所述上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd。

4.根据权利要求3所述的生物微区实时温度检测方法，其特征在于：所述NaOH水溶液、乙醇和油酸的体积比为3：8：20。

5.根据权利要求2所述的生物微区实时温度检测方法，其特征在于：在所述S2中，所述上转换纳米粒子NaYF₄：Yb/Er/Nd与所述IR806染料在CHCl₃中的质量比为4000：1。

6. 根据权利要求1至5中任一项所述的生物微区实时温度检测方法，其特征在于：所述上转换纳米探针能够被808 nm近红外激光同时直接激发和间接能量共振转移激发发出520nm和545nm的可见光。