[发明专利]检测标本中CKAP4试剂的应用及膀胱癌检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测标本中CKAP4试剂的应用及膀胱癌检测试剂盒。CKAP4不仅高表达于膀胱癌细胞系和它们分泌的外泌体中，更重要的是，在临床上CKAP4显著高表达于膀胱癌患者的尿液外泌体中，而在前列腺癌、肾细胞癌等泌尿系统癌症、泌尿系统炎症、以及健康供体的尿液外泌体中表达量很低，具有显著的特异性。因此，基于尿液外泌体CKAP4的检测手段是一种廉价、简捷、可满足多次检测的非侵入性的液体活检方法，特别适用于膀胱癌患者的诊断和复发监测。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，涉及一种检测标本中CKAP4试剂的应用及膀胱癌检测试剂盒。

背景技术

膀胱癌是一种发病于膀胱上皮的恶性泌尿系统疾病，据2020年的数据显示，全球范围内膀胱癌的发病率和死亡率都排在前10，每年有57.3万新发病例和21.3万死亡病例。其中，大约75％的为非肌层浸润性膀胱癌，25％为肌层浸润性膀胱癌。然而，无论是否发生肌层浸润，膀胱癌的一个重要特征是其高复发性，并且膀胱癌的转移会引起疾病的快速进展，并在短时间内致使患者死亡。因此，建立快速、简便、廉价、可满足高频率检测要求的方法，是应对膀胱癌复发和改善治疗效果的一项关键技术。

在现有的检测方法中，膀胱镜组织活检是临床诊断的金标准，这项技术是将膀胱镜经尿道插入膀胱，直接观察膀胱和尿道内病变情况，并切取疑似病灶组织用于病理诊断的侵入式有创检查方法，准确率高。然而，这种侵入式的检查方法不仅需要医生具有丰富的操作经验，并且并发症多，容易遗漏平坦型尿路上皮原位癌，患者的接受程度较低，难以满足大规模推广的需求。基于超声、CT、MRI等技术的影像学检查是一类在临床上广泛使用的检测手段。对于膀胱癌，尤其是早期的非浸润性膀胱癌或术后复发的微小病灶，该类影像学检测手段常因仪器分辨率的限制而导致错诊、漏诊现象，具有较大的局限性。另外，目前临床使用的基于尿液的无创检测技术如尿液脱落细胞学、核基质蛋白22(NMP22)及染色体荧光原位杂交(FISH),其灵敏度和特异性等性能指标难以满足临床诊断的需要，尤其对低级别膀胱癌检测灵敏度较差，更无法实现膀胱癌的早期筛查。

外泌体是由细胞分泌的尺寸在30-100nm的微小囊泡，携带了众多细胞内部的生物信息，能够准确反映其来源细胞的分子生物学特征。由于肾小球滤过的尺寸限制，血液中的外泌体通常无法直接进入泌尿系统，因此尿液中的外泌体均来源于泌尿系统细胞，能够有效地排除其他全身性细胞分泌的外泌体的干扰。研究表明，相比于正常细胞，癌细胞由于其增殖旺盛，具有更强的外泌体分泌能力，能够将更大量包含有细胞生物信息的外泌体分泌到细胞外环境。在分离纯化方面，由于外泌体本身的尺寸效应，分子量小的无机盐、生物小分子、杂质蛋白和分子量较大的脱落细胞等干扰性杂质会被极大地排除在外，因此膀胱癌作为一种发病于泌尿系统的疾病，通过患者尿液外泌体生物特征实现膀胱癌的无创检测是一种极具前途的新型分子检测手段。

目前，在外泌体生物标志物的研究方面，TACSTD2、AAT、Filamin-A和H2B1K被发现在肿瘤衍生的外泌体样本中含量较高，但是通过特异性抗体印迹技术检测，发现信号较差，仍无法达到各组患者与对照样本之间的统计学差异，加上检测灵敏度的不足，使其难以转化为临床应用成果。因此，发现可用于膀胱癌临床检测的尿液外泌体生物标志物具有显著的应用优势与市场需求。

发明内容

本发明公开了一种具有膀胱癌特异性的蛋白质分子CKAP4，该分子不仅高表达于膀胱癌细胞系及其外泌体中，而且在膀胱癌患者尿液的外泌体中也特异性高表达。本发明还发现CKAP4经由外泌体调控细胞表面力学性质，从而促进细胞的迁移和在小鼠体内的转移，强调了CKAP4在膀胱癌外泌体中的重要作用。

本发明的首要目的是提供一种检测标本中CKAP4试剂的应用，用于制备膀胱癌诊断制剂，所述的标本包括：组织、细胞、细胞外泌体、血液、尿液和尿液外泌体中的至少一种。

进一步地，CKAP4在膀胱癌患者标本中表达量要高于健康人、泌尿系统炎症，或者其他癌症患者。