[发明专利]一种快速筛选产细菌素微生物的方法

说明书

本发明公开一种快速筛选产细菌素微生物的方法，1)在无菌条件下，取待测样品研磨后按照比例融入生理盐水中，37℃条件下静置备用；2)取经过梯度稀释的100μL样品分别在营养琼脂平板上进行涂布；3)将涂布好的平板在37℃条件下分别进行无氧和有氧培养；4)取100μL过夜培养好的指示菌，按照0.4％～0.8％比例加入的软琼脂中，混合均匀后倒入平板中，并在37℃条件下进行培养；5)将培养好的A平板进行观察抑菌圈，利用无菌接种针将产抑菌物质的细菌进行接种，筛选出产细菌素的待测样品；本发明将所有致病微生物作为指示菌进行混合，加入至软琼脂中，通过观察抑菌圈，实现对产细菌素微生物的快速筛选工作。

技术领域

本发明属于微生物或酶；其组合物的技术领域，具体地涉及一种快速筛选产细菌素微生物的方法。

背景技术

细菌素是一种细菌由核糖体合成，且对亲缘细菌有高效抑制作用的多肽；被普遍认为是代替抗生素的抑菌物质之一；目前，乳酸链球菌素(nisin)是唯一被WHO/FDA授权并允许使用在食品中的细菌素，这主要的原因是由于nisin具有广谱的抑菌效应，同时相关研究对nisin的抑菌机理进行了详实的报告；然而随着耐nisin的致病微生物不断被检出，筛选具有广谱且对致病微生物有高效抑菌效应的新型细菌素具有重大的意义。

筛选产细菌素的微生物是发现和利用细菌素的第一且重要的步骤，应用最广泛的筛选方法为琼脂扩散法；琼脂扩散法具有操作简单、结果直观等优点，同时也具有准确性、重复性差等缺点，很难作为高通量的筛选方法；其他方法，如微孔板生物测定法，生物荧光法，PCR快速检测法等都对操作有极大的要求，此外，这些方法很难实现快速筛选的目的。

发明内容

有鉴于此，为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种快速筛选产细菌素微生物的方法，该快速筛选产细菌素微生物的方法先将样品匀浆后进行涂板，并进行培养；培养结束后，利用软琼脂(0.6％的琼脂添加量)中添加不同种致病微生物，直接倾倒至长满细菌的平板上，并再次进行培养；利用细菌素抑制作用的致病微生物并产生抑菌圈的效果，实现快速筛选产细菌素微生物的目的。

为了达到上述目的，本发明一种快速筛选产细菌素微生物的方法，其步骤在于：

1)在无菌条件下，取待测样品研磨后按照比例融入生理盐水中，37℃条件下静置备用；

2)取经过梯度稀释的100μL样品分别在营养琼脂平板上进行涂布；

3)将涂布好的平板在37℃条件下分别进行无氧和有氧培养；

4)取100μL过夜培养好的指示菌，按照0.4％～0.8％比例加入的软琼脂中，混合均匀后倒入平板中，并在37℃条件下进行培养；

5)将培养好的A平板进行观察抑菌圈，利用无菌接种针将产抑菌物质的细菌进行接种，筛选出产细菌素的待测样品。

进一步，所述指示菌设置为单增李斯特菌、蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌。

进一步，在步骤1)中，所述待测样品和生理盐水的比例设置为1:8～1：10。

进一步，所述待测样品和生理盐水的比例设置为1:8～1：10。

进一步，样品稀释稀释比例设置为1:500和1:800。

进一步，按照0.6％比例加入的软琼脂。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1、本发明快速筛选产细菌素微生物的方法先将样品匀浆后进行涂板，并进行培养；培养结束后，利用软琼脂(0.6％的琼脂添加量)中添加不同种致病微生物，直接倾倒至长满细菌的平板上，并再次进行培养；利用细菌素抑制作用的致病微生物并产生抑菌圈的效果，实现快速筛选产细菌素微生物的目的；