[发明专利]不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法

权利要求书

1.不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷适量，精密称定，加甲醇，制备成每1mL含升麻素苷2mg、升麻素2.3mg、5-O-甲基维斯阿米醇苷3mg和亥茅酚苷0.7mg的混合对照品溶液；

步骤二、采用高效液相色谱分别测定混合对照品溶液的色谱图，记录升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间；

步骤三、取N批不同地区的防风，分别加入甲醇超声30min，取上清液过滤，再加入甲醇，震荡之后再超声30min，再过滤，合并两次得到的滤液，蒸发，甲醇定容，最后用0.22μm微孔滤膜滤过，得到N批供试品溶液；

以1g防风计，第一次加入甲醇的量为20ml，第二次加入甲醇的量为20ml，蒸发至5ml，定容至10mL；

步骤四、采用高效液相色谱分别测定N批供试品溶液的色谱图，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，标定共有峰，建立N批不同产地防风的指纹图谱；

步骤五、基于步骤二中获得的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的保留时间，指认N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰；

步骤六、计算N批不同产地防风的指纹图谱中升麻素苷的色谱峰的峰面积，并以升麻素苷的色谱峰为参照峰，计算升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积；

步骤七、将N批不同地区的防风的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积带入Past软件进行聚类分析，并带入SIMCA14.1软件进行主成分分析。

2.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，高效液相色谱的色谱条件均为4.6mm×250mm，5μm；流动相甲醇(A)水(B)；梯度洗脱：0～20min，30％A；20～25min，45％A；25～50min，60％A；50～55min，90％A；55～60min，100％A；体积流量1mL/min；检测波长254nm；柱温30℃；进样量为10μL。

3.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，所述防风过2号筛。

4.根据权利要求1所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，N＝33。

5.根据权利要求1～4任何一项所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，还包括含量分析：

采用高效液相色谱分别测定不同浓度的混合对照品溶液的色谱图，分别以升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积(y)为纵坐标，分别以升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的浓度(x)为横坐标，绘制四条标准曲线；

将N批不同地区的防风的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的色谱峰的峰面积带入标准曲线，依据已知的升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素和亥茅酚苷的浓度，算出升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。

6.根据权利要求5所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，不同浓度的混合对照品溶液为：

含有升麻素苷2mg/ml，5-O-甲基维斯阿米醇苷3mg/ml，升麻素2.3mg/ml，亥茅酚苷0.7mg/ml的混合对照品溶液；

含有升麻素苷4mg/ml，5-O-甲基维斯阿米醇苷6mg/ml，升麻素4.6mg/ml，亥茅酚苷1.4mg/ml的混合对照品溶液；

含有升麻素苷8mg/ml，5-O-甲基维斯阿米醇苷12mg/ml，升麻素9.2mg/ml，亥茅酚苷2.8mg/ml的混合对照品溶液；

含有升麻素苷16mg/ml，5-O-甲基维斯阿米醇苷24mg/ml，升麻素18.4mg/ml，亥茅酚苷5.6mg/ml的混合对照品溶液；

含有升麻素苷32mg/ml，5-O-甲基维斯阿米醇苷48mg/ml，升麻素29.9mg/ml，亥茅酚苷11.2mg/ml的混合对照品溶液。

7.根据权利要求5所述的不同产地防风HPLC指纹图谱的构建及分析方法，其特征在于，高效液相色谱的色谱条件均为4.6mm×250mm，5μm；流动相甲醇(A)水(B)；梯度洗脱：0～20min，30％A；20～25min，45％A；25～50min，60％A；50～55min，90％A；55～60min，100％A；体积流量1mL/min；检测波长254nm；柱温30℃；进样量为10μl。