[发明专利]吡咯烷醇类化合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及微生物农药技术领域，具体的说是一种从菌株Aspergillus sp.TR15(保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2021年11月26日，保藏号：CCTCC NO：M 20211402)液体发酵产物中得到吡咯烷醇类化合物及其制备方法和在抑制植物病原菌、杀线虫方面的应用。吡咯烷醇类化合物为式(一)所示化合物1和2以及两者在农药上可接受的盐或溶剂合物。化合物1和2对耐药灰霉病菌的菌丝生长及孢子萌发具有显著抑制活性，ICsubgt;50/subgt;值优于常用商品化杀菌剂嘧菌酯及啶酰菌胺。此外，化合物1和2对南方根结线虫也具有杀线虫活性，LDsubgt;50/subgt;值分别为311.5与162.0μg/mL。因此，化合物1和2可作为具有抑制植物病原菌与杀线虫活性的先导化合物或新农药成分。

技术领域

本发明涉及微生物农药技术领域，具体的说是一种从菌株Aspergillus sp.TR15液体发酵产物中得到吡咯烷醇类化合物及其制备方法和在抑制植物病原菌、杀线虫方面的应用。

背景技术

灰霉病菌(Botrytis cinerea)能够危害葡萄、草莓及番茄等多种经济作物的田间生长及果实储藏，预估世界范围每年可造成超过100亿美元的经济损失。因此，灰霉病被列入世界十大植物真菌病害之一。例如：山东为我国最大的果蔬生产基地，由于果蔬大棚潮湿温暖的气候条件，造成灰霉病高发，每年均造成重大经济损失。截止目前，灰霉病的防治仍然以化学合成农药为主，例如：嘧菌酯与啶酰菌胺等。尽管化学合成农药能够较好防治灰霉病，但由于其相对单一的作用机制，导致菌株抗药性不断发展，由此陷入产生抗性——加大化学合成农药使用——抗性发展——农残过量及环境污染的恶性循环。除灰霉病外，果蔬大棚还面临南方根结线虫病的侵染，两者往往共同作用，既加重了经济损失，也大大增加了防治难度。

从微生物、植物等生物资源中寻找具有抑制植物病原菌或杀线虫的活性成分，已经成为开发“环境友好”新农药的重要来源。与化学合成农药相比，微生物次级代谢产物一般只含有碳、氢、氧及氮原子，具有易于发酵生产、毒性相对低且环境兼容性好等优点；此外，其防治植物病虫害往往具有“多点作用”的机制，已经成为对抗耐药病虫害的重要武器。

根据文献调研，吡咯烷醇类化合物具有抗肿瘤、免疫抑制、抗病毒及抗菌等多种作用。而本发明所涉及的两个吡咯烷醇类化合物为未见报道的新化合物，其结构骨架及脂肪长链取代基等结构特征区别于已知吡咯烷醇类化合物，且首次发现其对耐药灰霉病菌及南方根结线虫具有综合防治作用。

发明内容

本发明的目的是提供吡咯烷醇类化合物及其制备方法与应用。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

式(一)所示化合物1和化合物2以及两者在农药上可接受的盐或溶剂合物：

上述化合物的制备方法包括下列步骤：将菌株Aspergillus sp.TR15接种至已灭菌的液体培养基中，28℃静置发酵，发酵培养基经提取分离获得；所述菌株保藏编号为CCTCC NO：M 20211402。

在上述方案的基础上，所述液体培养基为蔗糖2％，甘露醇2％，蛋白胨0.5％，酵母浸粉0.3％，20％人工海水土豆浸出液配制，pH 7。

优选地，所述发酵培养基的提取分离步骤为：

(1)发酵培养基经乙酸乙酯萃取2-3次，合并萃取液进行浓缩，获得发酵粗提物；

(2)将上述发酵粗提物进行硅胶柱层析，按照洗脱液极性递增顺序，以梯度为100:1至1:1(v/v)的二氯甲烷-甲醇作为溶剂进行梯度洗脱；收集二氯甲烷-甲醇＝40:1洗脱组分，进行反相硅胶柱层析，以梯度为1:9至1:0(v/v)的甲醇-水作为溶剂进行梯度洗脱；