[发明专利]一种鸡精液的冷冻保存方法

权利要求书

1.一种鸡精液的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤；

步骤1：稀释液的配置：

基础稀释液为：谷氨酸钠1.92g、果糖1g、醋酸钠0.815g、柠檬酸钾0.128g、氯化镁0.068g，双蒸水定容至100mL，调节渗透压至333mOsm/Kg，pH至7.0；

卵黄上清制备方法：取鸡蛋卵黄50mL，加入等体积生理盐水，4℃磁力搅拌器搅拌1h至两者完全融合；4℃，10000g离心45min，离心两次，取上清液装入15mL离心管中，制备成卵黄上清液，将其置于4℃条件下保存备用；

步骤2：精液的稀释与平衡：

采用两步法稀释精液，首先将镜检合格精液混合，测量体积后按照实验分组分为若干等分，在按照1:2的稀释比例加入等温预热的步骤1得到的基础稀释液，用10层纱布包裹，避光放入4℃冰箱中平衡1h，再1:1加入4℃预冷的基础稀释液，继续平衡10min后装管冷冻；

步骤3：精液冷冻；

将经步骤2中稀释后的精液用罐装机装入0.50mL细管，封口完成后放入程序冷冻仪内进行冷冻，设定程序为：5℃～-35℃时降温速率为7℃/min，从-35℃到-120℃时降温速率为9℃/min进行冷冻，待冷冻结束后迅速投入到液氮中保存；

步骤4：精液解冻；

将装有精液的0.5mL细管从液氮中取出，迅速置于37℃水浴锅中30s水浴解冻，解冻后用对应的37℃基础稀释液1:1稀释，孵育10min后进行各项精液指标检测。