[发明专利]非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株及其应用

权利要求书

1.一种制备猪乙型脑炎灭活疫苗组合物的方法，包括：

采用非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株生产猪乙型脑炎病毒；

收获所述猪乙型脑炎病毒液，添加硫酸鱼精蛋白，经离心、过滤、浓缩、分子筛凝胶层析，得到猪乙型脑炎病毒抗原，制备猪乙型脑炎病毒灭活抗原后将其与动物疫苗油佐剂或动物疫苗水性佐剂混合，获得猪乙型脑炎灭活疫苗组合物；

所述非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株已于2021年10月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23098；

所述动物疫苗油佐剂由如下重量百分含量的组分组成：

注射用矿物油MARCOL 52                  85%

木糖醇月桂酸单酯                       2.5%

三聚甘油三油酸酯                       10%

烷基糖苷APG0816                        1.25 %

正癸醇                                 1.25 %；

所述动物疫苗水性佐剂由如下重量百分含量的组分组成：

注射用水溶液                           88%；

聚合物组合：

甘露聚糖                               3%；

聚乙烯吡咯烷酮K90                      3%

羟甲基纤维素                           1%

聚乳酸-羟乙酸PLGA                      1%

泊洛沙姆F188                           1%

助剂：

油酸                                   3%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株在V-SFM培养基上进行复苏和扩大培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸鱼精蛋白的终浓度1-2mg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述猪乙型脑炎病毒为猪乙型脑炎病毒SA14-14-2。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在采用所述非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株生产猪乙型脑炎病毒中，病毒接种后孵育阶段的生物反应器的参数为：温度36～37℃，pH值7.2±0.1，溶氧40～60％，搅拌速度40～80rpm，通气量0.1～0.5SPLM。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在采用所述非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株生产猪乙型脑炎病毒中，病毒孵育后的培养阶段的生物反应器的参数为：温度33～35℃，pH值7.4～7.8，溶氧40～60％，搅拌速度80～120rpm，通气量0.1～0.5SPLM。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株的扩大培养阶段的生物反应器培养的参数为：溶氧20～60％，pH 7.0～7.4，搅拌转速80～120rpm/min，通气量0.1～0.5SPLM，温度35-37℃。

8.非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株在生产猪乙型脑炎灭活疫苗组合物中的应用，其特征在于：制备猪乙型脑炎病毒灭活抗原后将其与动物疫苗油佐剂或动物疫苗水性佐剂混合，获得猪乙型脑炎灭活疫苗组合物；

所述非洲绿猴肾细胞的全悬浮细胞株已于2021年10月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23098；

所述动物疫苗油佐剂由如下重量百分含量的组分组成：

注射用矿物油MARCOL 52                 85%

木糖醇月桂酸单酯                      2.5%

三聚甘油三油酸酯                      10%

烷基糖苷APG0816                       1.25 %

正癸醇                                1.25 %；

所述动物疫苗水性佐剂由如下重量百分含量的组分组成：

注射用水溶液                          88%；

聚合物组合：

甘露聚糖                              3%；

聚乙烯吡咯烷酮K90                     3%

羟甲基纤维素                          1%

聚乳酸-羟乙酸PLGA                     1%

泊洛沙姆F188                          1%

助剂：

油酸                                  3%。