[发明专利]副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备黑青斑河鲀免疫佐剂中的应用

说明书

本发明公开了副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备黑青斑河鲀免疫佐剂中的应用，和副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备具有提高黑青斑河鲀免疫力效果的制剂中的应用，以及副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备具有预防或治疗黑青斑河鲀病害效果的药物中的应用。本发明发现副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF能够诱导相关免疫基因表达并参与相应免疫信号通路的激活，显著提高黑青斑河鲀对于抗原的免疫应答的能力，有望开发为黑青斑河鲀的免疫佐剂，进而预防副溶血弧菌引起的黑青斑河鲀病害。

技术领域

本发明属于副溶血弧菌技术领域，具体涉及副溶血弧菌重组鞭毛蛋白 rV.pFlaF在制备黑青斑河鲀免疫佐剂中的应用。

背景技术

副溶血弧菌是致水生动物患弧菌病的主要病原菌之一，可引起与组织损伤有关的炎症反应。鞭毛蛋白是副溶血弧菌中一种已被报道的毒力因子，是组成几乎所有运动型细菌鞭毛的主要结构蛋白。多数致病性弧菌的极鞭毛细丝都是由多个鞭毛蛋白组成的，如创伤弧菌的极鞭毛细丝是由FlaA，-B，-C和-D这四个鞭毛蛋白亚基组成；在其基因组中，还存在有flae和-f基因。弧菌一般具有5-6个鞭毛蛋白基因，与费氏弧菌、霍乱弧菌等菌类相同，副溶血弧菌基因组中存在6个鞭毛蛋白ORFs，分布在Fla FBA and Fla CDE两个簇。在哺乳动物中，副溶血弧菌鞭毛蛋白作为TLR5和NLRC4的特异性识别配体，TLR5与鞭毛蛋白特异性结合后可借助MyD88依赖的信号途径引起相关的炎症反应，而鞭毛蛋白激活的 NLRC4触发炎症小体的组装，最终导致caspase-1激活、IL-1β/IL-18分泌和细胞焦亡。在硬骨鱼中，目前仅有TLR5被报道为细菌鞭毛蛋白的模式识别受体。副溶血弧菌鞭毛蛋白由flaa、-b、-c、-d、-e和-f基因共同编码，其基因数目和排列与创伤弧菌一致。

黑青斑河鲀(green-spotted pufferfish，Tetraodon nigroviridis)，属于鲀形目、是四齿鲀科、鲀属的一种河口鱼类。其有一个很小的基因组，大约350Mb，比大多数脊椎动物基因组要小，是基因研究的理想模型。2004年Jaillon等得到了黑青斑河鲀的基因组数据，自此以后可从基因组数据库中获得黑青斑河鲀的遗传信息(Genoscope；http：//www.genoscope.cns.fr/externe/tetranew/)，以进行黑青斑河鲀的基因功能研究。研究结果显示，黑青斑河鲀基因组具有短内含子和较小的基因间区域，高度紧凑，是人类的八分之一倍，是斑马鱼的四分之一倍，但其基因组乃至基因结构却与两者高度相似。上述优势特征使其成为基因组研究的模式鱼类，此外也对其他物种的基因注释和功能研究有很大的益处。2016年，SwarajBasu等首次展示了黑青斑河鲀的发育转录组，进一步为其分子研究奠定了基础。因此，除斑马鱼外，黑青斑河鲀也可以作为一种新型的模式鱼类，可用于发育生物学、生理学、生物化学、遗传学、进化生物学和免疫学等研究领域。

副溶血弧菌鞭毛蛋白基因在数量和排列上与创伤弧菌相一致，在创伤弧菌中FlaA，FlaB，FlaC和FlaD参与鞭毛细丝的构成，而FlaE和FlaF分泌到细胞外参与生物膜的形成。虽然目前已有一些研究对细菌鞭毛蛋白的免疫原性和炎症反应诱导能力进行评估，然而，副溶血弧菌各鞭毛蛋白亚基对宿主炎症反应的影响及是否能够作为免疫佐剂增强鱼类先天免疫应答尚未明确，还需要进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于提供副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备黑青斑河鲀免疫佐剂中的应用。

本发明的目的还在于提供副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备具有提高黑青斑河鲀免疫力效果的制剂中的应用。

本发明的最后一个目的在于副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备具有预防或治疗黑青斑河鲀病害效果的药物中的应用。

本发明的上述第一个目的通过以下技术方案来实现：副溶血弧菌重组鞭毛蛋白rV.pFlaF在制备黑青斑河鲀免疫佐剂中的应用。