[发明专利]一种纳米酶原位水凝胶的制备方法及应用

权利要求书

1.一种纳米酶原位水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）多巴胺碳点的合成：称取1.0~2.0g多巴胺溶于20mL超纯水中，超声混合均匀，将溶液转移至聚四氟乙烯内衬水热反应釜中，于180~200℃下恒温加热8-10h，反应完成后自然冷却至室温，得棕色溶液；将棕色溶液用0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，再经高速离心，上清液真空干燥，得到多巴胺碳点；

（2）银纳米合成：将9~11mg多巴胺碳点与19~21mg柠檬酸钠溶于20mL超纯水中，油浴加热至100℃，加入AgNO₃，AgNO₃在混合液中的浓度为19~22mg/mL，避光搅拌60min，冷却至室温，高速离心，上清液冷冻干燥，得到银纳米；

（3）Cu,Mn-N-C纳米酶的制备：将0.7~1.0g醋酸铜、0.7~1.0g醋酸锰、20mL甲醇与50g氯化钾搅拌混匀后，放置在80℃下真空干燥24~48h，将干燥后固体与0.3~0.5g 2-甲基咪唑、15~25mL甲醇混匀后，放置在80℃下真空干燥24~48h除去甲醇，得到的固体颗粒置于管式炉中，在氮气保护下700~800℃煅烧2~3h，得到的固体用纯水洗涤，得到不溶于水的黑色小颗粒，即为铜、锰纳米酶Cu,Mn-N-C；

（4）水凝胶的合成：将0.2~0.3g冻干角蛋白粉、3~5mg Cu,Mn-N-C、1~2mg银纳米置于pH7.4PBS缓冲液5~10mL中，室温磁力搅拌分散，随后取1U/μL的葡萄糖氧化酶溶液20~40μL与分散液混合后，加入200-500μL葡萄糖溶液，其中葡萄糖的终浓度为5mmol/L，最后混合物在室温下静置，即得纳米酶原位水凝胶。

2.根据权利要求1所述的纳米酶原位水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（1）、（2）中高速离心是在10000 r/min下处理15min。

3.权利要求1-2中任一项所述的纳米酶原位水凝胶的制备方法制得的纳米酶原位水凝胶在制备糖尿病创面伤口愈合制剂中的应用。