[发明专利]可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

S1.将醛基化和马来酰化透明质酸溶于去离子水中，得到质量体积比为(10～15)g:100mL的溶液，然后加入光引发剂和聚乙二醇二丙烯酸酯，得到第一溶液；S1中所述醛基化和马来酰化透明质酸是先采用马来酸酐接枝，然后采用高碘酸钠氧化得到；S1中所述醛基化和马来酰化透明质酸中马来酰基摩尔取代度为0.5～3，醛基化的氧化度为0.1～0.3；

S2.将3，3’-二硫代二丙酰肼溶于间充质干细胞上清液中，得到质量体积比为(0.5～1.5)g:100mL的第二溶液；

S3.将所述第一溶液和所述第二溶液混合后，进行紫外光照射交联，得到可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶；

S1中所述醛基化和马来酰化透明质酸的制备方法包括：

S101：在40～60℃的条件下，将透明质酸溶液和马来酸酐溶液反应12～48h，得到反应液，透明质酸与马来酸酐的质量比为1:(1～5)；对反应液进行离心，将离心后的上层清液加入到1mol/L的碱溶液中；调节液体的pH值至8～9，将调节后的溶液倒入丙酮中沉淀，沉淀5～10h后，抽滤得到沉淀物并使用透析膜进行透析；透析48h后将透析液在温度为-40℃、压强为20-50Pa条件下，冷冻干燥48～72h，得到马来酰基摩尔取代度为0.5～3的马来酰化透明质酸；

S102：将所述马来酰化透明质酸完全溶解于磷酸盐缓冲溶液中，马来酰化透明质酸与磷酸盐缓冲溶液的质量体积比为1g：(50～200)mL；在马来酰化透明质酸溶液中加入高碘酸钠，马来酰化透明质酸与高碘酸钠的质量比为1：0.5～1.5；将马来酰化透明质酸溶液和高碘酸钠在25～60℃条件下反应1～24h后；将反应液透析2天形成醛基化和马来酰化透明质酸溶液，然后将其冷冻干燥，得到氧化度为0.1～0.3的醛基化和马来酰化透明质酸；

S1中所述第一溶液中聚乙二醇二丙烯酸酯与透明质酸溶液的体积比为(20～100)μL：1mL；S3中所述第一溶液与第二溶液的体积比为1:1，光照时间为10～20min，光强为45mW/cm²，所述紫外光的波长为365nm。

2.根据权利要求1所述的可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：S101中所述透明质酸溶液由透明质酸在第一非质子溶剂中搅拌得到，第一非质子溶剂为二甲亚砜，透明质酸与非质子溶剂的质量体积比为1g:(100～150)mL；所述马来酸酐溶液由马来酸酐溶解于第二非质子溶剂中得到，马来酸酐与第二非质子溶剂的质量体积比为1g:(2～5)mL；所述透析膜的截留分子量为8000～14000Da。

3.根据权利要求1所述的可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：S101中所述碱溶液为碳酸氢钠溶液或碳酸氢钾溶液，S102中所述磷酸盐缓冲溶液为pH值为5.0的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲溶液、K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液或PBS缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：S2中所述3，3’-二硫代二丙酰肼是由3，3’-二硫代二丙酸二甲酯与水合肼在20～50℃下反应10～24h得到。

5.一种根据权利要求1至4任一项所述方法制得的可负载间充质干细胞上清液成分的可注射光增强自愈合水凝胶，其特征在于：该水凝胶包括包含醛基化和马来酰化透明质酸与聚乙二醇二丙烯酸酯的第一溶液、以及包含3，3’-二硫代二丙酰肼和间充质干细胞上清液成分的第二溶液。