[发明专利]一种提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法和菌株及应用在审
| 申请号： | 202210094603.7 | 申请日： | 2022-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN114480436A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 白净;裴俊伟;黄文慧;纪莉莲;扶教龙;徐玉泉 | 申请（专利权）人： | 苏州科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/113;C12N1/15;C12N15/80;A01N63/30;A01P7/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 重庆航图知识产权代理事务所(普通合伙) 50247 | 代理人： | 胡小龙 |
| 地址： | 215009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 罗伯茨绿僵菌 杀虫 毒力 方法 菌株 应用 | ||
1.一种提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法，其特征在于，包含如下步骤：通过向罗伯茨绿僵菌野生型菌株中导入特异DNA分子，从而提高罗伯茨绿僵菌的致死率，缩短半致死时间；所述特异DNA分子中含有gpdA组成型启动子、转录因子MrTF；所述野生型菌株为ARSEF23菌株；所述gpdA组成型启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示，转录因子MrTF的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述gpdA组成型启动子启动转录因子MrTF基因的表达。
2.根据权利要求1所述的提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法，其特征在于，所述特异DNA分子中还包含筛选标记bar基因，所述筛选标记bar基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
3.根据权利要求1所述的提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法，其特征在于，所述向罗伯茨绿僵菌野生型菌株中导入特异DNA分子的方式为：将特异DNA分子构建到双元载体上获得重组质粒，在农杆菌的介导下转化罗伯茨绿僵菌野生型菌株，获得杀虫毒力提高的罗伯茨绿僵菌突变菌株。
4.根据权利要求3所述的提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法，其特征在于，所述双元载体为pAG-H3载体，特异DNA分子通过Kpn1和Spe1酶切位点连接到pAG-H3载体上。
5.根据权利要求3所述的提高罗伯茨绿僵菌杀虫毒力的方法，其特征在于，所述农杆菌为根癌农杆菌菌株AGL-1。
6.一种特异DNA分子，其特征在于，含有gpdA组成型启动子、转录因子MrTF和筛选标记bar基因；所述gpdA组成型启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示，转录因子MrTF的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，筛选标记bar基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述gpdA组成型启动子启动转录因子MrTF基因的表达。
7.含有权利要求6所述的特异DNA分子的重组表达载体。
8.含有权利要求7所述的特异DNA分子的重组菌，其特征在于，是将权利要求6所述的特异DNA分子导入罗伯茨绿僵菌ARSEF 23菌株得到的。
9.权利要求8所述的重组菌在制备杀虫菌剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，所述杀虫菌剂用于杀灭大蜡螟，蝗虫，天牛，蚊，蝇。
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