[发明专利]一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法，包括对hGH重组菌株进行发酵培养后进行收集与裂解，得到裂解液上清；对裂解液上清进行hGH融合蛋白纯化，得到hGH融合蛋白；对hGH融合蛋白进行酶切及hGH纯化，得到重组hGH蛋白；使用重组hGH蛋白进行小鼠免疫，得到免疫小鼠，对免疫小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到融合细胞；对融合细胞中的单克隆细胞株进行筛选，得到筛选细胞；使用筛选细胞对小鼠进行腹水实验，制备hGH单抗；使用辣根过氧化酶对hGH单抗进行标记，得到标记单抗；对HRP标记单抗与筛选细胞进行配对，得到hGH抗体组合，解决了现有的hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法。

背景技术

人生长激素(hGH)是由191氨基酸残基组成的分子量为22000道尔顿的单链球状蛋白，由脑下垂体分泌出，经由下丘脑释放,它最主要的生理作用是通过促进身体各组织、器官以及骨骼中受体细胞的蛋白质合成和脂肪的分解,进而促进人的代谢和生长发育。hGH刺激骨骺端软骨细胞分化、增殖，刺激软骨基质细胞增长，引起线性生长加速及骨骼变宽。hGH调节生长激素不足或成人的脂肪、骨代谢、心肾功能，改善运动能力和生活质量。

目前，hGH蛋白的来源主要是早期从尸体的脑垂体中分离纯化得到，因该方法原料短缺，费事费力，故成本很高，从而增加了hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法，旨在解决现有的hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种重组人生长激素单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

获取hGH重组菌株，对所述hGH重组菌株进行发酵培养，得到发酵菌液；

对所述发酵菌液进行收集与裂解，得到裂解液上清；

对所述裂解液上清进行hGH融合蛋白纯化，得到hGH融合蛋白；

对所述hGH融合蛋白进行酶切及hGH纯化，得到重组hGH蛋白；

使用所述重组hGH蛋白进行小鼠免疫，得到免疫小鼠，对所述免疫小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到融合细胞；

对所述融合细胞中的单克隆细胞株进行筛选，得到筛选细胞；

使用筛选细胞对小鼠进行腹水实验，制备hGH单抗；

使用辣根过氧化酶对所述hGH单抗进行标记，得到标记单抗；

将所述HRP标记单抗与所述筛选细胞进行配对，得到hGH抗体组合。

其中，所述获取hGH重组菌株，对所述hGH重组菌株进行发酵培养，得到发酵菌液的具体方式为：

获取hGH重组菌株，将所述hGH重组菌株溶解，得到溶解菌液；

将所述溶解菌液中加入含有100ug/mL卡那霉素的5ml培养基中与卡那霉素混匀后培养12-14小时，得到第一种子液；

将所述第一种子液转接至含有100ug/mL卡那霉素的50ml培养基中进行培养2-4h，当所述50ml培养基中的菌体浓度OD600上升至1.0时，得到第二种子液；

将所述第二种子液转接至含有100ug/mL卡那霉素的1000ml培养基中进行培养1-2h，当所述1000ml培养基中的菌体浓度OD600上升至0.8时，得到第三种子液；

在所述第三种子液中滴加IPTG，直至所述第三种子液中的所述IPTG的浓度为0.5mM/L，得到第四种子液；