[发明专利]一种芍药带侧芽芽基组织培养获取丛生芽的方法

说明书

本发明公开了一种芍药带侧芽芽基组织培养获取丛生芽的方法，属于组织培养技术领域，所述方法的步骤如下：(1)挖取芍药地下芽，放入真空袋抽真空放入4℃冰箱保存。(2)消毒：洗洁精浸泡，流水冲洗后放入加有羧苄青霉素的锥形瓶摇30min，超净台中使用75％酒精、4％次氯酸钠、无菌水依次消毒；(3)启动培养：切除顶芽，选择带良好侧芽的芽基接种入启动培养基中。培养基为WPM添加6‑BA1.0mg/L、赤霉素0.5mg/L和抗生素羧苄青霉素或硫酸链霉素或头孢霉素钠；(4)增殖培养：培养基为WPM+6‑BA浓度1mg/L+PVP浓度0.2‑1.5g/L。本发明通过添加抗生素并优化培养基配方，有效降低芍药带侧芽芽基组织培养的污染率，提高丛生芽的增殖率，以便于分切丛生芽苗，诱导生根。

技术领域

本发明涉及芍药组织培养技术领域，具体为一种用芍药地下芽带侧芽芽基获得丛生芽的方法。

背景技术

芍药为芍药科芍药属多年生草本花卉，是我国传统的名花，具有重要的药用和观赏价值，备受我国和世界人民的喜爱。

芍药的传统繁殖方法包括分株繁殖和播种繁殖，这些方法易受季节限制，且繁殖系数较低，繁殖速度慢，不能满足市场对芍药的大量需求。而采用组织培养技术可以较好地保持原有品种优良性状、缩短育种周期、提高繁殖系数，便于进行大规模生产。前人在进行芍药组织培养中，主要应用地下芽诱导丛生芽体系，但仍存在污染率高，繁殖系数不高等问题。

芍药芽基是指顶芽下部生长侧芽的部位，芍药侧芽频发，但由于顶端优势得不到良好发育。且前人在用地下茎段进行组织培养过程中存在污染率高、增殖率低的缺点，这成为制约芍药组织培养成功的主要问题之一。为此，我们推出了一种芍药带侧芽芽基组织培养获取丛生芽的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种芍药带侧芽芽基组织培养获取丛生芽的方法，利用去除顶端优势的方法，促进芍药侧芽发育从而诱导丛生芽，有效降低了污染率，提高了增殖率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种芍药带侧芽芽基组织培养获取丛生芽的方法，该方法按以下步骤进行：

(1)采集与保存外植体：选择健康的优良植株，选取未露出土面的、生长健壮的、鳞片包裹紧实的、颜色正常的地下芽，用手术刀横切芽基基部与根茎部连接的部位。不需清洗，放入真空袋中，用真空泵抽成真空状态，随后放入4℃冰箱中保存48-72小时。

(2)消毒：取芍药地下芽用水刷洗干净，剥离掉表面一层的表皮，将其放入添加洗洁精的清水中浸泡30min，然后在流水下冲洗30min，随后放入装有100-300mg/L的羧苄青霉素的锥形瓶中放到摇床摇30min后放入超净台，超净台中先倒入加吐温80的75％酒精大力摇晃30s，再用4％次氯酸钠消毒3次，每次5分钟，最后用无菌水冲洗5次。

(3)启动培养：在超净台上，将冲洗后的地下芽从瓶中夹出切取顶芽，选择带良好侧芽的芽基接种入启动培养基中进行培养。所述启动培养基以WPM为基本培养基，添加有6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、赤霉素0.5mg/L和抗生素；所述抗生素为羧苄青霉素100-500mg/L、硫酸链霉素10-50mg/L和头孢霉素钠100-500mg/L，培育30-40天。

(4)增殖培养：将(3)中获得的幼芽分别切取转入增殖培养基，所述培养基为WPM+6-BA浓度1mg/L+PVP浓度0.2-1.5g/L，培养1-2个月。

具体地，芍药品种包括‘奶油碗’(Paeonia lactiflora‘Bowl ofCream’)、‘阳光女孩’(P.‘Sunny Girl’)、‘御前表演’(P.‘CommandPerformance’)。

进一步地，所述培养光照至少12个小时/天光照，光照强度1800Lx，培养温度在24±2℃，空气相对湿度为65％，Ph 5.80-5.85。培养基均添加蔗糖30g/L，琼脂6.0-6.5g/L。