[发明专利]检测小麦粒重TaRSR-A1基因的KASP标记及其应用

权利要求书

1.检测小麦粒重TaRSR-A1基因的KASP标记，其特征在于：所述KASP标记为由引物1、引物2和引物3组成的成套引物Kasp-TaRSR-A1；

所述引物1自5’端到3’端依次为标签序列A和SEQ ID NO：01的第22-39位所示的单链DNA；

所述引物2自5’端到3’端依次为标签序列B和SEQ ID NO：02的第22-39位所示的单链DNA；

所述引物3为SEQ ID NO：03所示的单链DNA。

2.根据权利要求1所述的KASP标记，其特征在于：所述标签序列A为FAM荧光标签序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：01的第1-21位所示；所述标签序列B为HEX荧光标签序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：02的第1-21位所示。

3.一种检测小麦粒重TaRSR-A1基因的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1所述的KASP标记。

4.一种检测或辅助检测小麦TaRSR-A1基因型的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、提取待测小麦基因组DNA；

步骤二、以所述待测小麦基因组DNA为模板，采用成套引物Kasp-TaRSR-A1进行PCR扩增，得扩增产物；

所述成套引物Kasp-TaRSR-A1由引物1、引物2和引物3组成，所述引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO：01所示，所述引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO：02所示，所述引物3的核苷酸序列如SEQ ID NO：03所示；

步骤三、将步骤二所得扩增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果进行基因分型。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤二中所述PCR扩增体积为5 µl，反应体系如下：0.056 μl Primer Mix，2.5 μl Master Mix，2.2μl Template DNA，0.244 μlddH2O；所述Master Mix中包含荧光探针A、荧光探针B、淬灭探针A和淬灭探针B；所述PrimerMix中各引物的配比为：12%的引物1、12%的引物2和30%的引物3。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤三中，按照如下确定小麦TaRSR-A1基因型：若待测小麦扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则小麦TaRSR-A1基因型为AA；若待测小麦扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红色，则小麦TaRSR-A1基因型为GG；若待测小麦扩增的产物的荧光信号数据经KlusterCaller软件分析呈现绿色，则小麦TaRSR-A1基因型为AG。

7.权利要求1或2所述的KASP标记、权利要求3所述的试剂盒、或权利要求4-6任意一种所述的方法在如下（A）-（F）任意一种中的应用：

（A）：用于检测小麦或小麦杂交后代的TaRSR-A1基因；

（B）：用于鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状；

（C）：用于培育、筛选或辅助筛选具有高或低千粒重性状的小麦单株、株系、品系或品种；

（D）：制备用于检测小麦或小麦杂交后代的TaRSR-A1基因的产品；

（E）：制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状的产品；

（F）：制备用于培育、筛选或辅助筛选具有高或低千粒重性状的小麦单株、株系、品系或品种的产品。