[发明专利]一种将测序微球固定在基因测序芯片内表面的方法

权利要求书

1.一种将测序微球固定在基因测序芯片内表面的方法，其特征在于，包括：

1)提供基因测序芯片，所述基因测序芯片的内表面有预先加工好的微坑；

2)将测序微球分散到第一溶液中，形成测序微球悬浮液，再将所述测序微球悬浮液通入芯片流动池，使测序微球进入芯片内表面的微坑中；所述第一溶液中包含使得微球处于收缩状态的组分；所述测序微球为水凝胶微球，或者非刚性微球；

3)用第二溶液置换所述第一溶液，使测序微球体积增大，并卡在所述微坑中，使得微球加载固定到微坑中；所述测序微球在第二溶液中比在第一溶液中具备更大的体积；

4)除去未加载固定的微球。

2.一种可重复使用的基因测序方法，其特征在于，包括：

(1)提供基因测序芯片，所述基因测序芯片的内表面有预先加工好的微坑；

(2)将测序微球分散到第一溶液中，形成测序微球悬浮液，再将所述测序微球悬浮液通入芯片流动池，使测序微球进入芯片内表面的微坑中；所述第一溶液中包含使得微球处于收缩状态的组分；所述测序微球为水凝胶微球，或者非刚性微球；

(3)用第二溶液置换所述第一溶液，使测序微球体积增大，并卡在所述微坑中，使得微球加载固定到微坑中；所述测序微球在第二溶液中比在第一溶液中具备更大的体积；

(4)提供测序反应物，进行测序；

(5)去除测序微球；

(6)重复步骤(2)-(4)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微坑的深度大于宽度，即深宽比大于1。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测序微球为水凝胶微球，其直径比微坑直径大10％-25％，所述测序微球悬浮液中的测序微球的最终直径，大于微坑的开口尺寸，比微坑直径大1％-10％，优选大5％-10％。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一溶液包括甲醇、乙醇、异丙醇、金属复合物、碱或碱土金属盐、非离子聚合物或去离子水与前面任意一项或者多项的组合。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)进一步包括在测序微球悬浮液中加入磁性微球，所述磁性微球的直径大于微坑直径，将所述磁性微球和测序微球溶液充分混匀后，在外加磁场的作用下，通过磁性微球将测序微球碾压进微坑中。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述磁性微球的数量少于测序微球的数目，二者比例为1/2-1/10。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第二溶液包括超纯水、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、常规测序缓冲液中的一种，用所述第二溶液缓慢置换所述第一溶液，静置反应，使测序微球体积增大，直到测序微球恢复其收缩前的直径，从而使测序微球卡在微坑内固定。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测序微球表面修饰有特定化学基团，用于直接连接待测核酸或者通过连接扩增引物间接地将待测核酸固定到测序微球表面；所述化学基团包括生物素、链霉亲和素、羧基，氨基，硅羟基，叠氮基团，炔基，环氧乙基等。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当进行多次测序反应时，所述步骤(6)变为重复步骤(2)-(5)。

11.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(3)和步骤(4)之间还包括对待测基因片段进行扩增。

12.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(5)中向芯片流动池通入所述第一溶液，使所述测序微球收缩解离出坑。

13.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(5)中可使所述测序微球降解，从而去除测序微球。