[发明专利]一种测序微球的加载固定方法

权利要求书

1.一种测序微球的加载固定方法，其特征在于，包括：

(1)提供基因测序芯片，所述基因测序芯片的内表面有预先加工好的微坑；所述微坑表面修饰有化学基团；

(2)提供测序微球与磁性微颗粒的混合液，其中所述测序微球用于连接待测核酸片段；所述测序微球表面修饰有化学基团；

(3)提供外部磁场，所述磁性微颗粒在磁场力作用下驱动测序微球进入基因测序芯片内表面的微坑中，通过测序微球表面的化学基团与微坑表面修饰的化学基团的反应将测序微球固定在微坑内。

2.一种可重复使用的基因测序方法，其特征在于，包括：

(1)提供基因测序芯片，所述基因测序芯片的内表面有预先加工好的微坑；所述微坑表面修饰有化学基团；

(2)提供测序微球与磁性微颗粒的混合液，其中所述测序微球用于连接待测核酸片段；所述测序微球表面修饰有化学基团；

(3)提供外部磁场，所述磁性微颗粒在磁场力作用下驱动测序微球进入基因测序芯片内表面的微坑中，通过测序微球表面的化学基团与微坑表面修饰的化学基团的反应将测序微球固定在微坑内；

(4)去除磁性微颗粒以及未加载到微坑内的测序微球；

(5)加入测序试剂，对所述待测核酸片段进行测序反应；

(6)去除测序微球；

(7)重复步骤(2)-(5)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测序微球表面修饰有化学基团，所述基团包括生物素，链霉亲和素，羧基，氨基，硅羟基，叠氮基团，炔基，环炔基，环氧乙基的一种或多种，所述化学基团用以固定在微坑内以及连接待测核酸片段。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微坑表面修饰的化学基团包括：生物素，链霉亲和素，羧基，氨基，硅羟基，叠氮基团，炔基，环炔基，环氧乙基的一种或多种，所述化学基团通过与测序微球表面修饰基团发生反应将测序微球固定在微坑内表面。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测序微球的直径可小于，等于或略大于微坑直径，所述磁性微颗粒的直径大于微坑直径；所述测序微球的直径略大于微坑直径指的是，测序微球的直径比微坑直径大1％-10％。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测序微球的数目多于磁性微颗粒，测序微球可以是磁性微颗粒数目的2倍，3倍，4倍，5倍，6倍，7倍，8倍，9倍，10倍，或者上述相邻两个值之间的任意值。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述磁性微颗粒表面无化学修饰，所述磁性微颗粒与测序微球无偶联。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述外部磁场由一个或多个条形磁铁提供，所述一个或多个条形磁铁沿其厚度h方向充磁，所述磁铁的N极或S极紧邻芯片微坑所在平面一侧。

9.根据权利要求1或2所述的方法，在磁场力作用下，磁性微颗粒驱动测序微球，通过磁性微颗粒的循环往复运动，增加了测序微球表面修饰的化学基团与芯片微坑内修饰的化学基团的接触概率，从而将测序微球通过化学连接的方式固定在测序芯片的微坑中。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当进行多次测序反应时，所述步骤(7)变为重复步骤(2)-(6)。

11.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述测序微球为可降解的水凝胶微球，所述水凝胶微球由可逆交联剂交联，加入还原剂打断所述交联，从而降解所述水凝胶微球。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述可逆交联剂包括N,N'-双(丙烯酰)胱胺。