[发明专利]一种分泌胰高血糖素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种分泌胰高血糖素单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用。所述杂交瘤细胞株，包括保藏编号为GDMCC NO：62086的杂交瘤细胞株GLU‑N2‑6、保藏编号为GDMCC NO：61986的杂交瘤细胞株MM02H。本发明通过获得分泌抗胰高血糖素单克隆抗体的杂交瘤细胞株(杂交瘤细胞株GLU‑N2‑6和杂交瘤细胞株MM02H)，获得针对胰高血糖素不同抗原表位的单克隆抗体两种，该单克隆抗体特异性、亲和力、效价均较高，可以通过配对检测血清或血浆中的胰高血糖素含量，应用于检测胰高血糖素含量变化或诊断以胰高血糖素异常表达为表征的疾病的产品中的应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种分泌抗胰高血糖素单克隆抗体杂交瘤细胞株及检测胰高血糖素的单克隆抗体与应用。

背景技术

胰高血糖素(glucagon)是一种由胰脏胰岛α细胞分泌的激素，由N-末端组氨酸为起点，C末端苏氨酸为终点的29个氨基酸残基组成的一条直链多肽，分子量为3485。

胰高血糖素在临床上具有重要作用，研究已证实胰高血糖素能够促进肝细胞内环磷腺苷(c-AMP)的生物合成，评价肝硬化患者的肝脏储备功能；促进糖原分解和糖异生，升高血糖，治疗低血糖；抑制胃肠蠕动，用于胃肠造影及内镜下胰胆管造影；激活腺苷酸环化酶，增强心肌收缩力，治疗难治性心衰；评价糖尿病患者胰岛细胞生理功能、辅助诊断胰高血糖素瘤等临床意义。

近年来，多个制药公司致力于胰高血糖素类似物的研制，有的在进行临床试验，有的已经完成了临床试验进入市场，表明胰高血糖素在不久的将来必定成为糖尿病、心血管等疾病的常用治疗药物之一。准确地监测胰高血糖素含量变化对于评价胰岛细胞、血糖控制及相关代谢疾病的治疗是必不可少的前提。

但是目前的胰高血糖素类似物很多，且血清或血浆样本中胰高血糖素类似物的浓度远高于胰高血糖素的浓度，因此，亟需一种特异性识别血清或血浆样本中的胰高血糖素的单克隆抗体及分泌抗胰高血糖素单克隆抗体的杂交瘤细胞株与应用。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种分泌抗胰高血糖素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及检测胰高血糖素的单克隆抗体与应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一目的，本发明提供了一种抗胰高血糖素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，包括保藏编号为GDMCC NO：62086的杂交瘤细胞株GLU-N2-6、保藏编号为GDMCC NO：61986的杂交瘤细胞株MM02H。杂交瘤细胞株GLU-N2-6和杂交瘤细胞株MM02H保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏时间分别为2021年11月29日和2021年10月28日。

第二目的，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性识别胰高血糖素。

本发明筛选出的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可以特异性识别血清或血浆样本中的胰高血糖素，该单克隆抗体特异性、亲和力均较高，可以通过配对检测血清或血浆中的胰高血糖素含量，具有检测胰高血糖素含量变化或诊断以胰高血糖素异常表达为表征的疾病的产品中的应用。

经过单克隆抗体效价检测的试验，杂交瘤细胞株GLU-N2-6和杂交瘤细胞株MM02H单克隆抗体效价分别为1：512000和1:256000，效价高。

作为本发明所述单克隆抗体的优选实施方式，所述单克隆抗体的抗原表位处于胰高血糖素的N端、C端，处于胰高血糖素的N端的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，处于胰高血糖素的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

采用ELISA法确认单克隆抗体识别抗原表位，杂交瘤细胞株GLU-N2-6可以特异性识别胰高血糖素的N端，杂交瘤细胞株MM02H可以特异性识别胰高血糖素的C端。