[发明专利]一种用于阿尔茨海默症早期检测的芯片试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于阿尔茨海默症早期检测的芯片试剂盒，其微流控芯片包括PDMS层和玻璃层，微流控芯片上设置第一进口、第二进口、第三进口、第四进口、外泌体捕获区、蛋白免疫磁珠混合区、特异蛋白捕获区和出口；第一进口与外泌体捕获区相通，外泌体捕获区经蛋白免疫磁珠混合区与特异蛋白捕获区相通，特异蛋白捕获区与出口相通；第二进口通过对称设置的微流道构成的内圈流道连通于第一进口和外泌体捕获区之间，第三进口通过对称设置的微流道构成的中圈流道连通于外泌体捕获区和蛋白免疫磁珠混合区之间，第四进口通过对称设置的微流道构成的外圈流道连通于蛋白免疫磁珠混合区和特异蛋白捕获区之间。优点在于：检测方便，检测速度快。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体地说是一种用于阿尔茨海默症早期检测的芯片试剂盒。

背景技术

阿尔茨海默症（AD）是一类慢性发展的中枢神经系统慢性病，也是目前造成人类主要死因但又缺乏特效治疗方案的疾病。因此，在临床中，早期筛查、诊断对AD的防治尤为重要。病理性生物标志物的确立是做到对AD患者早期诊断和筛查的前提，也是检验医学中的热门难题。数十年来，“Aβ瀑布假说”是AD发病机制中的最经典的理论之一，该理论解释阿尔茨海默症是由于Aβ在大脑皮层和海马区大量沉积，出现后续的由磷酸化的tau蛋白介导的细胞内神经元纤维缠结，进而导致神经元凋亡，损伤影响患者的认知功能。根据美国国立老化研究院和阿尔茨海默症协会（NIA-AA）最新的ATN诊断标准，明确将Aβ、总tau和磷酸化的tau蛋白的浓度变化作为诊断AD的重要标志，而目前上述生物标志物需要通过采集脑脊液进行检测。脑脊液虽然能够较好的反映脑内的代谢情况，但是获取脑脊液需要侵入性腰穿，其有创性和高成本导致无法大规模和重复取样，因此无法进行长期监测。相对于脑脊液，血液样本获取便利，而且创伤性小，在短时间内可多次采血，患者的接受度较高，然而血液中AD标志物由于其含量极低且特异性不高，检测难度较大。

外泌体是一种由细胞分泌的胞外囊泡，作为胞间信使在细胞间的通讯中扮演着重要角色。神经退行性病如朊蛋白病、帕金森病等病的相关致病蛋白都可以通过外泌体释放到细胞外。有研究证实AD相关病理蛋白（Aβ、tau）是通过外泌体进行运输的，意味着从血液里提取的外泌体中的Aβ和tau蛋白可以替代从脑脊液提取从而诊断AD。而如何将可作为AD新型生物标志物的外泌体快速精确的分离出来是需要解决的一个关键问题。

常规的外泌体分离方法有高速离心、共沉淀以及免疫亲和等，这些方法虽然能够很好的分离外泌体，但其缺点在于时间长、费用高等。而对比这些常规的外泌体分离方法，微流控芯片作为一种新型技术在外泌体的分离领域展现出巨大的优势：高速、高通量、自动化、集成和便捷等。不仅如此，微流控芯片还可以将外泌体的分离及分析集成在一张芯片上，具有高效、便捷以及高灵敏度等优点。尽管血液中AD的特征性病理蛋白（Aβ、tau）的浓度相对于脑脊液要低10-100倍，但是通过微流控芯片能将外周血来源的外泌体富集，达到浓缩Aβ、tau蛋白的目的，大大提高了AD生物标志物的可检测浓度；对于微流控的蛋白检测方式，目前常用的有荧光免疫技术（FIA）、磁敏免疫技术（MI）以及化学发光免疫技术（CLIA）。其中荧光免疫技术需要激发光，对仪器要求较高且测定对象有限。而磁敏免疫技术由于其芯片成本较高，测试通量有限也限制了它们的推广。而化学发光免疫技术因其不需要激发光源、灵敏度高、信号稳定、线性范围宽，非常适合于现场分析。

发明内容

本发明之目的是弥补上述之不足，向社会公开检测方便，检测速度快的一种用于阿尔茨海默症早期检测的芯片试剂盒。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种用于阿尔茨海默症早期检测的芯片试剂盒，包括有微流控芯片，所述的微流控芯片包括有PDMS层和玻璃层，所述的微流控芯片上设置有

一第一进口，用于输入血浆与磁珠的混合液；

一第二进口，用于输入清洗缓冲液、裂解液、洗脱液；

一第三进口，用于输入Aβ或tau的免疫磁珠混合液、Aβ或tau的抗体、酶联二抗；

一第四进口，用于输入荧光酶底物；