[发明专利]miRNA作为生物标志物在诊断膀胱癌中的应用

说明书

本发明涉及miRNA作为生物标志物在诊断膀胱癌中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供一种生物样本中miRNA作为生物标志物在诊断膀胱癌中的应用，该miRNA为hsa‑miR‑221、hsa‑miR‑101、hsa‑miR‑215、hsa‑miR‑642a中的至少1种。该应用能够判断提供生物样本的受试者是否患有膀胱癌，或者判断受试者是否存在患有膀胱癌的风险，有助于临床医生迅速掌握患者病情，从而及时制定个体化的治疗方案。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及miRNA作为生物标志物在诊断膀胱癌中的应用。

背景技术

膀胱癌是起源于膀胱尿路上皮的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。全球范围内膀胱癌发病情况：发病率位居所有恶性肿瘤第11位，其中男性发病率为9.0/10万，位列男性恶性肿瘤的第7位；女性为2.2/10万，位列女性十位之后；死亡率位居所有肿瘤的第十三位，男性及女性死亡率分别为3.2/10万和0.9/10万，死亡率位列男性恶性肿瘤第9位。2016年我国预测数据显示新发膀胱癌8.05万例，其中男性6.21万例(男性恶性肿瘤第6位)、女性1.84万例；死亡3.29万例，其中男性2.51万例(男性恶性肿瘤第11位)、女性0.78万例。膀胱癌发病存在地区性、种族性及性别的差异，可见于各年龄段，高发年龄50～70岁，且随着年龄增加，发病率也逐渐增加。

膀胱内长期慢性炎症刺激及长期异物刺激(留置导尿管、结石)与发生膀胱癌关系密切，主要病理类型为鳞状细胞癌和腺癌，确诊时多为晚期，预后差。既往接受过环磷酰胺化疗、盆腔放疗、滥用非那西汀等均可增加患膀胱癌的风险。

研究表明早期诊断及治疗可使膀胱癌患者的生存率及预后效果提高4-5倍。因此，针对膀胱癌的早期诊断，早期筛查，将膀胱癌患者的治疗窗口提前，改善患者的预后，及时评价放化疗的效果，针对膀胱癌患者的个性化医疗及用药，尤为重要。

目前膀胱癌的筛查或者诊断主要依据患者病史、症状及体征，结合实验室检查、影像学检查、尿细胞学及尿肿瘤标记物检查、膀胱镜检查做出临床诊断。膀胱镜是最重要的检查，通过膀胱镜下活检进行病理检查是诊断膀胱癌的金标准。上尿路的影像学检查可了解是否合并肾盂和(或)输尿管肿瘤。影像学由于自身技术特点只能检测到生长到一定程度的肿瘤，而膀胱镜下活检病理方法从患者身体获取肿瘤组织，不但操作技术难度大，成本高，效率低而且全过程会导致患者非常痛苦，依从性较差，无法大批量进行筛查，而且受到医生技术水平及患者身体状况等诸多因素影响，不能用于早期筛查和临床诊断。

miRNA是具有在转录后水平调控基因表达功能的非编码小分子RNA，长度约18-24nt，参与细胞分裂增殖、分化与发育，以及代谢等许多重要的生物过程，在生物种属之间具有高度的保守性、时序性以及组织特异性。它位于基因内含子中，成熟的miRNA进入RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)中，形成非对称性复合物。RISC中成熟的miRNA链可与其靶向mRNA 3’非翻译区特异性结合，从而降解靶mRNA，阻断蛋白合成，调控基因的表达。

miRNA作为一种在某些肿瘤中异常表达的非编码的小RNA，参与许多肿瘤的发生发展的相关基因的调控，在这一过程中发挥着十分关键的作用，且其即使在大量核酶存在的情况下依旧十分稳定，在各种体液中表达丰富，可以作为肿瘤诊断和预后判断的生物标志物。在未来临床治疗中，miRNA不仅可以成为新的疾病早期诊断和疾病进程相关的标记物，而且也有望通过改变miRNA的表达或者其靶基因的表达治疗疾病。寻找和鉴定与疾病发生相关的miRNA及其靶基因为miRNA的临床治疗提供基础。

基于以上原因，发现具有高灵敏度及特异性的诊断膀胱癌的生物标志物miRNA，并建立无创早期筛查方法及评价放化疗治疗效果的检测方法是目前研究的热点也是当务之急。而液态活检技术(Liquid Biopsy)正好可以解决目前这一痛点，可以很好的解决上述问题。目前临床上还没有针对膀胱癌进行筛查的比较理想的产品，有一些泛癌种的诊断产品主要是针对血液中的DNA片段、血液中循环肿瘤细胞、以及微小RNA通过高通量测序检测基因突变。