[发明专利]一种嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明属于生物与医药技术领域，具体公开了一种嵌合抗原受体，嵌合抗原受体包含CLDN3结合结构域、跨膜结构域、共刺激结构域、胞内信号传导结构域；CLDN3结合结构域包含抗CLDN3单链抗体，所述抗CLDN3单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的嵌合抗原受体能够特异识别CLDN3抗原，具有良好的靶向性，并且在T细胞中能够稳定的表达；包含该嵌合抗原受体的CAR‑T细胞在体外表现出很好的靶向性，其对CLDN3阳性表达的细胞有极强的杀伤能力，而对抗原阴性的细胞几乎没有任何杀伤作用；并且其在体内实验中同样显示出很好的肿瘤靶向性，因此，本发明制备的CAR‑T细胞能够用于肿瘤的靶向治疗。

技术领域

本发明属于生物与医药技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

恶性肿瘤严重人类生命健康和社会进步。肿瘤治疗主要依赖手术、化疗和放疗这些传统手段。尽管传统治疗手段在一定程度上改善了肿瘤治疗临床效果，但是患者5年生存率依然较低。肿瘤治疗需要更加有效的新型治疗方法。

近年来，免疫治疗在临床实践中展示出较好的抗肿瘤效果，成为了肿瘤治疗的新选择。以嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)修饰T细胞为代表的肿瘤靶向免疫治疗的成就尤为突出，在体外和临床实验中表现出良好的靶向性、杀伤性和持久性，展示了巨大的应用前景。CAR序列主要由抗原识别区和共刺激信号分子以及其他片段组成，其中抗原识别区负责与特异分子结合、保证杀伤特异性；共刺激信号则决定了CAR-T细胞活化程度与持久性。对CAR-T细胞来说，其识别的靶抗原决定了治疗有效性和安全性。肿瘤、尤其是实体肿瘤具有很强的异质性，导致肿瘤细胞上抗原表达的差异巨大。肿瘤细胞的这一特性决定了需要不断寻找新靶点来满足治疗需要。

连接蛋白3(Claudin3，CLDN3)是参与细胞间紧密连接构成的重要蛋白分子，具有维持上皮细胞及内皮细胞的屏障功能，并对细胞旁物质选择渗透性和细胞极化等重要生理功能有决定作用。近来研究发现，锌指转录因子、表皮生长因子等信号分子参与调节CLDN3的基因表达，而CLDN3蛋白的异常表达与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切关系。但目前还没有任何关于CLDN3特异性嵌合抗原受体的研究和报道。因此，本发明的目的旨在设计一种CLDN3特异性嵌合抗原受体。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种CLDN3特异性嵌合抗原受体及其应用。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含CLDN3结合结构域、跨膜结构域、共刺激结构域、胞内信号传导结构域；其中，所述CLDN3结合结构域包含抗CLDN3单链抗体，所述抗CLDN3单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述共刺激结构域为来自CD28蛋白和/或4-1BB蛋白的共刺激信号分子。

在本发明的一个具体实施方式中，所述共刺激结构域为来自CD28蛋白的共刺激信号分子；更进一步地，来自CD28蛋白的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述共刺激结构域为来自4-1BB蛋白的共刺激信号分子；更进一步地，来自4-1BB蛋白的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，所述跨膜结构域为来自CD28蛋白和/或CD8a蛋白的多肽。

在本发明的一个具体实施方式中，所述跨膜结构域为来自CD28蛋白的多肽；更进一步地，来自CD28蛋白的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在本发明的一个具体实施方式中，所述跨膜结构域为来自CD8a蛋白的多肽；更进一步地，来自CD8a蛋白的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。