[发明专利]一种修饰的棒状杆菌属微生物及其生产苏氨酸的应用和构建方法

权利要求书

1.一种修饰的棒状杆菌属微生物，其特征在于，所述微生物相比于未修饰的微生物，其假定膜蛋白的表达降低或不表达，且所述微生物相比于未修饰的微生物具有增强的苏氨酸生产能力。

2.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，所述微生物体内假定膜蛋白的表达降低或不表达是通过降低编码假定膜蛋白基因的表达或敲除内源的编码假定膜蛋白的基因来实现的。

3.根据权利要求2所述的微生物，其特征在于，采用诱变、定点突变或同源重组的方法来降低编码假定膜蛋白基因的表达或敲除内源的编码假定膜蛋白的基因。

4.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，所述微生物与未修饰的微生物相比，其体内苏氨酸合成相关的酶的活性增强和/或降低；

其中，活性增强的与所述苏氨酸合成相关的酶选自天冬氨酸氨基转移酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、变异链球菌来源的NADP依赖的甘油醛-3-磷酸脱氢酶和高丝氨酸脱氢酶中的至少一种；活性降低的与所述苏氨酸合成相关的酶选自4-羟基四氢吡啶二羧酸合酶和柠檬酸合成酶中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的微生物，其特征在于，所述微生物为如下①～⑥中的任一种：

①假定膜蛋白的表达降低或不表达且高丝氨酸脱氢酶活性增强的微生物；

②假定膜蛋白的表达降低或不表达且高丝氨酸脱氢酶和/或磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性增强的微生物；

③假定膜蛋白的表达降低或不表达且高丝氨酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶和/或天冬氨酸氨基转移酶活性增强的微生物；

④假定膜蛋白的表达降低或不表达且高丝氨酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸氨基转移酶和/或变异链球菌来源的NADP依赖的甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性增强的微生物；

⑤假定膜蛋白的表达降低或不表达，高丝氨酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸氨基转移酶和/或变异链球菌来源的NADP依赖的甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性增强且4-羟基四氢吡啶二羧酸合酶活性降低的微生物；

⑥假定膜蛋白的表达降低或不表达，高丝氨酸脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸氨基转移酶和/或变异链球菌来源的NADP依赖的甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性增强且4-羟基四氢吡啶二羧酸合酶和/或柠檬酸合成酶活性降低的微生物。

6.根据权利要求4所述的微生物，其特征在于，所述微生物体内苏氨酸合成相关的酶的活性的增强是由选自以下1)～5)，或任选的组合实现的：

1)通过导入具有所述酶的编码基因的质粒而增强；

2)通过增加染色体上所述酶的编码基因的拷贝数而增强；

3)通过改变染色体上所述酶的编码基因的启动子序列而增强；

4)通过将强启动子与所述酶的编码基因可操作地连接而增强；

5)通过对酶的氨基酸序列进行改变而增强；

所述微生物体内苏氨酸合成相关的酶的活性的降低是由选自以下6)～10)，或任选的组合实现的：

6)通过导入具有所述酶的突变编码基因的质粒而降低；

7)通过减少染色体上所述酶的编码基因的拷贝数而降低；

8)通过改变染色体上所述酶的编码基因的启动子序列而降低；

9)通过将弱启动子与所述酶的编码基因可操作地连接而降低；

10)通过对酶的氨基酸序列进行改变而降低。

7.根据权利要求1-5任一项所述的微生物，其特征在于，所述微生物为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。