[发明专利]肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建方法

说明书

本发明提供一种肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建方法。本发明系统研究了8个NKG2D配体(MICA、MICB及ULBP1‑6)在HCC中的表达和分布，发现MICA、MICB和ULBP4在HCC组织中高表达，ULBP3可能在HCC进展中发挥重要作用。提示在HCC中可以通过靶向MICB构建高亲和力的NKG2D‑CAR‑NK细胞。基于MICA、ULBP3和ULBP5的RFS预测模型可以预测肝切除术后肝癌患者的复发，可能具有潜在的临床价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学诊断技术领域，具体地说，涉及一种肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建方法。

背景技术

肝细胞癌是全球常见的恶性肿瘤之一，其病死率和死亡率依然很高。尽管近年来在肝细胞肝癌治疗方面发展迅速，然而，对于这种致死性疾病的预后诊断方法依然较少。目前，手术切除手术凭借其术中低死亡率的特点已经成为治疗HCC的最为安全的一种治疗手段。然而，高复发率依然是术后死亡的一个主要原因，会导致肝癌患者的总体预后不佳。因此，找到新的标记物用于预测肿瘤的复发，则可以在临床实践中指导我们对患者进行危险分层、采取个体化监测并有针对性的进行干预。

NK细胞是固有免疫系统中重要的效应细胞，执行免疫清除和免疫监视功能，是机体抵御入侵的病原体和肿瘤细胞的第一道防线。NK细胞在肝脏内高度富集，占肝内淋巴细胞的30％～50％，是外周血中占比的2～5倍。肝脏内NK细胞的细胞毒性和产生细胞因子的能力均高于外周血NK细胞，而且部分具有独特的免疫表型和功能特征。NKG2D是一种C型凝集素受体，是NK细胞重要的激活受体，它可识别一系列亲和力不同、结构多样的配体，包括MHC-Ⅰ类分子相关分子A/B(MICA/B)及6种UL16结合蛋白(ULBP1-6)。NKG2DL一般在正常的细胞中不表达，常表达于病毒感染细胞，及肝癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤等肿瘤细胞中。这些配体均能与NKG2D结合，激活下游级联信号转导，在抗肿瘤免疫应答过程中起重要作用。

已有研究证实NKG2DL在肝癌细胞中表达并与预后相关。2012年Kamimura等研究发现ULBP1主要表达于发育不良结节(dysplastic nodule，DN)、高分化和中度分化HCC的肝癌细胞，而不表达于低分化HCC的癌细胞；且ULBP1表达阴性的HCC患者无复发生存时间明显短于ULBP1阳性表达的HCC患者。而2021年Cadoux等研究发现ULBP1和其它配体MICA、MICB、ULBP2均在肝癌中高表达，且它们的表达与肿瘤的分级和低分化(low levels ofdifferentiation)呈正相关，MICA、MICB、ULBP1、ULBP2高表达的患者预后差且容易发生早期复发。这提示肝癌中NKG2D配体的表达和患者早期复发之间的关系仍然存在争议。

发明内容

本发明旨在探讨MICA、MICB及ULBP1-6等NKG2D配体在肝细胞癌中的表达，并评估与预后和临床因素的关系，并进一步基于NKG2D配体构建预测肝细胞癌早期复发的模型。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供用于预测肝细胞癌患者术后复发的生物标记物，其为肝细胞癌患者体内MICA和/或ULBP3基因的相对表达量；MICA基因表达量与术后复发的可能性呈正相关，ULBP3基因表达量与术后复发的可能性呈负相关。

第二方面，本发明提供检测MICA、ULBP3和/或ULBP5基因表达量的试剂在制备肝细胞癌患者术后复发的评价试剂中的应用。

优选地，检测MICA基因表达量的试剂包含如SEQ ID NO:1-2所示的引物，检测ULBP3基因表达量的试剂包含如SEQ ID NO:3-4所示的引物，检测ULBP5基因表达量的试剂包含如SEQ ID NO:5-6所示的引物。