[发明专利]一种评估肾脏衰老的方法

说明书

本发明属于医学领域的技术，具体涉及一种评估肾脏衰老的方法，将体检者的血液样本检测端粒长度（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C），并利用公式Ka=0.15*T+0.1*N+0.75*C评估肾脏衰老指数。通过使用本发明的评估方法，可有效评估肾脏衰老的情况，更直观的反映出相同年龄阶段下个体在普通人群中的肾脏衰老程度，提高对于肾脏衰老甚至是肾脏疾病的风险管控能力。

技术领域

本发明属于医学技术领域，具体涉及一种评估肾脏衰老的方法。

背景技术

人口老龄化是全球现代化过程中必经的发展趋势。我国同样正在快速进入老龄化社会，预计到2050年，我国老龄人口数量将达到4.87亿，占总人口的34.9%，届时，每三个人中将有一个老年人。目前，已有的研究发现多种衰老标志物，如端粒、DNA甲基化、NAD+、α酮戊二酸等等，这些作为生理衰老的指标。同时，多个器官衰老的标志物也有报道。胱抑素C是体检中反应肾脏功能的一个指标。对这些衰老标志物的深入研究将有利于准确评估生理衰老和预测老年疾病风险。由此，保障老年人的生理健康，从而更好地保障老年人的生活质量的需要比以往更加强烈。建立科学的衰老评估体系是其中重要一环。然而，体检者通常对于自己的体检报告缺乏直观的认识，对于个体肾脏功能亚健康状态难以判断，且目前缺少科学评估肾功能衰老的方法等问题。因此，如何科学的评估肾脏衰老的方法成为了至关重要的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种评估肾脏衰老的方法，包括如下步骤：

S1、取外周血，采用胶乳增强透射免疫比浊法测定胱抑素C；

S2、另取外周血，加入高氯酸充分混匀裂解至其由红色变为棕色，随后离心10min，取上清，加入NAD+提取液，充分混匀，静置等待分层，取最上层液体作为样品；

S3、取样品稀释液加入到样品中进行稀释，向96孔板中加入样品，分别向每个孔中加入反应液，避光孵育40min；

S4、加入硫酸终止反应，上酶标仪，根据标准品获得的方程对样品进行计算，得出样品的NAD+浓度；

S5、使用Magen试剂盒提取外周血中的基因组DNA，取基因组DNA，加入Hinf I、RsaI、RNase A酶切，过夜，加入DNA loading buffer；用琼脂糖胶，TAE缓冲液，电泳12-16h，溴酚蓝距胶孔15cm时停止电泳；

S6、将步骤S4所得琼脂糖胶放置于干胶仪上，抽真空干胶1h，往干好的琼脂糖胶加入变性液反应，随后加入中和液反应，接着加入预杂交液反应，杂交过夜；

S7、将步骤S5所得加入洗液Ⅰ，清洗15min，重复3次，随后加入洗液Ⅱ，清洗15min，重复2次，用保鲜膜包好，磷屏曝光3h，扫屏，处理数据，计算平均端粒长度;

S8、采用统计软件作图，基于普通人群的端粒长度（T）、NAD+浓度（N）和胱抑素C（C）三个指标的大数据统计进行比较，依据检测数值在统计图中的分布位置进行评分，分值范围0-100分，将分值代入计算公式，以评估肾脏衰老指数（Ka），评估肾脏衰老指数计算公式为：Ka=0.15*T+0.1*N+0.75*C。

进一步地，步骤S2的NAD+提取液是由3体积1,1,2-三氯三氟乙烷与1体积三辛胺充分混匀而得。

进一步地，步骤S3的样品稀释液是用800体积的水加入3体积的1M，pH=8.0的Tris缓冲液所得，反应液由以下组分组成：61mmol/L、PH为7.4的双苷肽，CCK-8，2.6千单位/mL的乙醇脱氢酶，3.5mol/L的烟酰胺，无水乙醇；上述组分的体积比为820:100:5:28.5:57。

进一步地，步骤S6的变性液由1.5M氯化钠和0.5M氢氧化钠组成，所述中和液由1.5M 氯化钠和0.5M PH为8.0的Tris-HCl组成，预杂交液由10X Denhardt's溶液、5X SSC缓冲液、0.5% SDS组成。

进一步地，步骤S7的洗液I为2X SSC缓冲液，含0.5%SDS，洗液II为2X SSC缓冲液，含0.1%SDS。