[发明专利]一种D-氨基酸氧化酶及其在制备L-草铵膦或其中间体中的应用

权利要求书

1.一种D-氨基酸氧化酶，其氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比包含选自以下一个或多个的氨基酸残基差异：

K29G/H/I/N/Q/W/Y/C/L；V42C/D/E/H/Y；E195N/Y/Q；C234L；V326W；

并具有不低于如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所示的D-氨基酸氧化酶的活性和/或热稳定性。

2.如权利要求1所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比包含选自以下两个或多个的氨基酸残基差异：V42Y、E195Y、V326W、C234L。

3.如权利要求2所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶与SEQ IDNO:1相比包含C234L的氨基酸残基差异，并进一步包含V42Y、E195Y和V326W中的一个或两个的氨基酸残基差异；

较佳地，所述D-氨基酸氧化酶与SEQ ID NO:1相比具有选自以下任一组的氨基酸残基差异：

C234L和V42Y；

C234L和E195Y；

C234L和V326W；

C234L、K29C和V42Y；

C234L、K29G和V42Y；

C234L、K29L和V42Y；

C234L、V326W和V42Y；

C234L、V42Y和E195Y；

C234L、E195Y和V326W。

4.如权利要求2所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，所述D-氨基酸氧化酶与SEQ IDNO:1相比包含E195Y的氨基酸差异，并进一步包含V42Y或V326W的氨基酸残基差异；

较佳地，所述D-氨基酸氧化酶与SEQ ID NO:1相比具有选自以下任一组的氨基酸残基差异：

E195Y和V42Y；

E195Y和V326W；

E195Y、K29Q和V42Y；

E195Y、K29W和V42Y；

E195Y、K29Y和V42Y。

5.如权利要求1所述的D-氨基酸氧化酶，其特征在于，其氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比具有选自以下任一组的氨基酸残基差异：

K29G；K29H；K29I；K29N；K29Q；K29W；K29Y；V42C；V42D；V42E；V42H；V42P；V42Y；E195H；E195N；E195Y；E195Q；C234L；V326W。

6.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1-5任一项所述的D-氨基酸氧化酶。

7.一种重组表达载体，其包含如权利要求6所述的核酸。

8.一种转化体，其包含如权利要求6所述的核酸或如权利要求7所述的重组表达载体；较佳地，所述转化体的宿主细胞为埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)例如E.coliBL21(DE3)。

9.一种制备如权利要求1-5任一项所述的D-氨基酸氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括在适于表达所述D-氨基酸氧化酶的条件下培养如权利要求8所述的转化体。