[发明专利]ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用

说明书

本发明公开了ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用，属于医药技术领域。本发明经过研究发现，通过在增生性瘢痕成纤维细胞中过表达ETV4基因，可以显著降低其纤维化特性，既开拓了ETV4基因新的应用领域，也为用于制备治疗增生性瘢痕的药物提供了新思路，具有积极的药学价值和广泛的社会意义。

技术领域

本发明涉及ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

成纤维细胞在创面愈合过程中被过度激活，其分泌的细胞外基质大量沉积，是导致增生性瘢痕形成的重要原因。增生期瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic scarfibroblasts，简称HSF)合成和分泌胶原能力增强，特别是Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量远远高于正常皮肤。寻找有效的靶标分子，降低增生性瘢痕成纤维细胞的纤维化特性，减少Ⅰ、Ⅲ型胶原产生，重塑细胞外基质，是目前增生性瘢痕治疗的研究热点。

ETV4(英文全称为ETStranslocation variant 4)基因，属于ETS(E26translocation-specific)转录因子家族，又叫做PEA3或E1AF。目前，ETV4基因相关的研究主要集中在其与肿瘤局部侵袭和远处转移之间的关系，例如：在一种低转移性的乳腺癌细胞MCF7中过表达ETV4，则会导致其侵袭性增加；而在肿瘤细胞中敲低ETV4的表达，则会导致肿瘤侵袭性降低。但是，ETV4基因与增生性瘢痕成纤维细胞之间的关联性，目前并没有相关报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用。

本发明的原理是：

本发明分别检测增生性瘢痕成纤维细胞及正常真皮成纤维细胞中ETV4基因的mRNA表达水平，发现ETV4基因在人增生性瘢痕成纤维细胞中表达明显低于正常真皮成纤维细胞。通过构建ETV4过表达慢病毒载体，转染至人增生性瘢痕成纤维细胞后，其Ⅰ、Ⅲ型胶原以及α-肌动蛋白(ACTA2)表达明显下调，基质金属蛋白酶1(MMP1)显著上调，在体外实现改善增生性瘢痕的作用。

本发明的有益效果是：

本发明经过研究发现，通过在增生性瘢痕成纤维细胞中过表达ETV4基因，可以显著降低其纤维化特性，既开拓了ETV4基因新的应用领域，也为用于制备治疗增生性瘢痕的药物提供了新思路，具有积极的药学价值和广泛的社会意义。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述重编程增生性瘢痕成纤维细胞的方法是：

步骤1：取新鲜的人增生性瘢痕标本，进行组织消化，分离获取增生性瘢痕成纤维细胞；

步骤2：将如SEQ ID No.1所示的人ETV4基因CDS区编码序列连接至pCDH质粒载体上，获取pCDH-ETV4过表达质粒并进行扩增；

步骤3：将目的基因pCDH-ETV4质粒、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞，收集病毒上清，浓缩后，获得慢病毒悬液；

步骤4：取步骤1的增生性瘢痕成纤维细胞，培养传至第3代，得到P3代增生性瘢痕成纤维细胞，待细胞融合至70％-80％，用步骤3的慢病毒悬液进行感染，72h后，即得到过表达ETV4基因重编程的增生性瘢痕成纤维细胞。

采用上述进一步的有益效果是：通过上述操作，可以获得过表达ETV4基因的增生性瘢痕成纤维细胞。