[发明专利]一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物

权利要求书

1.一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，合成以RBD靶向递送shRNA的化合物，包括分别合成以保守基因为靶标的冠状病毒shRNA和以ACE2为受体的冠状病毒RBD，然后将合成的RBD分别连接到合成的shRNA的正反义链上，构成以RBD向ACE2靶向递送抗变异靶标shRNA的化合物，进而以脂质体修饰，合成的化合物使各组分相互增效，其中RBD的靶向递送使shRNA能发挥针对ACE2表达细胞的特异性作用，RBD又是蛋白抗原，被shRNA连接的2个RBD因改变了分子结构和分子量，抗原性更强，被RBD连接的shRNA增加了胞膜通透性和抗核酸酶稳定性，shRNA和脂质体又是增强RBD疫苗效果的免疫佐剂。

2.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述以保守基因为靶标是指用于合成shRNA的siRNA选自数据库记载的各种致病性冠状病毒及其变异毒株的共有基因，使合成的shRNA靶向干扰所述共有基因，从而起广谱抗变异毒株的作用；所述共有基因包括但不限于超保守基因、保守基因和/或由保守微卫星拼接的基因。

3.根据权利要求1、2所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述合成shRNA包括但不限于首先合成2条互补的约21-25nt的寡核苷酸多肽siRNA以及合成起间隔作用的碱基序列，然后将所合成的siRNA和碱基序列连接成由中间碱基序列间隔成loop环的小发夹shRNA双链，继之在shRNA双链的每条单链上各连接RBD多肽。

4.根据权利要求1、2所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述以保守基因为靶标是指靶向所述保守基因的siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.1～41；所述以超保守基因、保守基因或保守微卫星为靶标的siRNA序列包括但不限于SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5；所述保守基因包括但不限于NC_045512.2株、DELTA变异株和/或OMICRON变异株共有的基因序列，其siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.9～11、SEQID NO.16～20、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26～27、SEQ ID NO.31～33、SEQ ID NO.35或SEQID NO.37～39。

5.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述合成RBD包括但不限于合成S蛋白的第319-510位氨基酸序列、能与ACE2结合但不易发生变异的N439、V483和Q493位点的保守氨基酸序列以及经密码子优化的氨基酸序列。

6.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述RBD除了起到靶向递送shRNA和作为重组蛋白疫苗的重要作用外，还能与病毒竞争ACE2受体，所以具有阻止病毒通过ACE2进入靶细胞而引起感染的作用。

7.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述脂质体的佐剂作用还包括保护shRNA和RBD的长效运行、缓慢释放和内吞入胞浆。

8.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述连接或合成包括但不限于将RBD的糖基化N氨基与shRNA的反义链3'末端、正义链5'末端或3'末端进行连接，并包括但不限于以二硫键、磷酸二酯键、二硫代磷酸脂键、硫醚键、肟键、酰胺键、马来酰亚胺-巯基键的化学偶联或共价偶联进行连接。

9.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，所述nCOVsiRNA药物包括但不限于以RBD多肽或S蛋白多肽与siRNA相连接构成的结合物RBD-siRNA和S-siRNA，以及其脂质体修饰复合物RBD-siRNA/Lip和S-siRNA/Lip。

10.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物，其特征在于，获得包括但不限于靶向SEQ ID NO.1～39的化合物RBD-shRNA-RBD。