[发明专利]布雷正青霉菌株及其在制备布雷菲德菌素A中的应用

权利要求书

1.一株布雷正青霉菌株，2020年08月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.20244，名称为布雷正青霉BT-38。

2.一种权利要求1所述的布雷正青霉菌株在制备布雷菲德菌素A中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：以虫蛀或发霉大米为底物，在20～35℃的温度下对布雷正青霉BT-38进行发酵培养，培养时间为3～11天，所得发酵产物经分离纯化得到布雷菲德菌素A。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述虫蛀或发霉大米与水混合制成固体培养基进行发酵培养。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵培养的步骤是：

布雷正青霉BT-38接种至PDA培养基，25～35℃培养2～7天，挑取菌种接种至真菌液体培养基，25～35℃培养2～9天，得到种子液；

种子液以体积比1～50％接种至虫蛀或发霉大米培养基。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述虫蛀或发霉大米培养基主要组成是水和虫蛀或发霉大米，其中虫蛀或发霉大米的初始含水量为46％-61％，121℃灭菌20min；所述真菌液体培养基的组成：蛋白胨5.0g，葡萄糖：20.0g，酵母粉：2.0g，磷酸氢二钾1.0g，硫酸镁0.5g，pH值6.4±0.2加入到1000ml蒸馏水中。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，分离纯化包括以下步骤：

发酵产物经体积百分含量为60％-100％的乙醇提取、浓缩后，得到提取液和固体残渣，提取液用乙酸乙酯萃取；所得萃取相经减压蒸馏后，向得到的含布雷菲德菌素A的粗提物中加入石油醚，离心后取沉淀，得到布雷菲德菌素A粗品，加入甲醇或乙醇后配制成布雷菲德菌素A饱和溶液，趁热过滤，冷却结晶，得到布雷菲德菌素A。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：乙醇提取控制温度为20～100℃，乙醇提取步骤中的发酵产物与乙醇的质量体积比为1∶0.5～32(g∶ml)，提取的时间为5～60min。

9.根据权利要求2-8中任一项所述的应用，其特征在于：分离得到的布雷菲德菌素A纯度≥99％。

10.根据权利要求3-7任一项所述的应用，其特征在于：发酵产物中的布雷菲德菌素A，在虫蛀大米培养基中产量≥2.88mg/g(虫蛀大米量)；

在发霉大米培养基中产量≥2.37mg/g(发霉大米量)；

大米培养基中分离纯化后纯度≥99％的BFA的产量为1.58mg/g(大米量)。