[发明专利]一种改造尿酸酶、基因序列、制备方法及应用

说明书

本申请提供了一种改造尿酸酶及其核苷酸序列，改造尿酸酶通过将球形节杆菌尿酸酶上肽段替换成鹅源尿酸酶肽段方式制得，还提供了改造尿酸酶在制备对应鹅高尿酸症药物或饲料中的用途。本发明选择球形节杆菌尿酸酶相比于其他物种的尿酸酶，具有水溶性好，单位酶活性高等优点，便于改造尿酸酶的生产。本发明即是通过同源肽段替换的方法对球形节杆菌尿酸酶进行改造，并进一步融合鹅源IgY Fc片段以获得本发明尿酸酶，与原始尿酸酶相比，对鹅的免疫原性显著降低，且在鹅体内的半衰期得到大大延长。此外，由于鹅属于经济动物，因此本发明相比现有技术具有更低的成本，低廉的价格适合市场推广使用。

技术领域

本申请属于酶领域，更具体地说，是涉及一种改造尿酸酶、基因序列、制备方法及应用。

背景技术

鹅高尿酸症是由多种原因引起的尿酸在体内大量积聚，造成内脏、皮下结缔组织和关节等部位发生尿酸盐沉积而引起的一种代谢性疾病，以关节肿大、跛行、腹泻等为特征，不同品种鹅均可发生，但多见于雏鹅发病。

目前针对于高尿酸症的一个主要药物成分为尿酸氧化酶（Urate Oxidase，UOX），又称为尿酸酶（Uricase），但天然尿酸酶的含量有限，提取困难。而目前通过重组手段得到的两种重组尿酸酶产品——拉布立酶和培戈洛酶在实际应用过程中仍然有一系列问题需要解决：1、免疫原性问题。由于尿酸酶多来源于哺乳动物和微生物等，不是使用者的自身蛋白，使用时易造成机体过敏等安全性问题；2、体内半衰期短。重组尿酸酶在体内的半衰期为18小时左右，需多次注射使用，常因产生针对尿酸酶的抗体造成疗效下降甚至无效果。PEG化后的重组尿酸酶半衰期可延长至10～12天，同时对机体的免疫原性也得到降低，但是使用该方法生产重组尿酸酶的成本太高，无法用于经济动物鹅等的高尿酸症临床应用。因此，开发对鹅等经济动物免疫原性低、半衰期长、价格低廉的改造尿酸酶具有重要意义。

发明内容

为实现上述目的，本申请采用的技术方案是：提供一种改造尿酸酶，改造尿酸酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

一种改造尿酸酶的基因序列，改造尿酸酶的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

一种改造尿酸酶的制备方法，包括以下步骤：

S1、将球形节杆菌尿酸酶上肽段“¹⁵⁸FVGYPKDKY¹⁶⁷”替换成鹅源尿酸酶“FEGFYKNEH”肽段，得到初级改造尿酸酶；

S2、通过连接序列在初级改造尿酸酶的碳端连接鹅源免疫球蛋白分子IgY Fc片段，得到次级改造尿酸酶。

可选的，连接序列的氨基酸序列为GGGGSGGGGS。

可选的，在次级改造尿酸酶的碳端增加氨基酸标记序列。

可选的，氨基酸标记序列为6个组氨酸组成的序列。

可选的，将标记后的改造尿酸酶制成重组质粒并在毕赤酵母感受态细胞中转化表达，得到可代谢改造尿酸酶的重组毕赤酵母菌株；

对重组毕赤酵母菌株进行培养和发酵，得到包含有改造尿酸酶的发酵液；

对发酵液进行浓缩和纯化处理，得到改造尿酸酶成品。

一种改造尿酸酶的应用方法，改造尿酸酶在制备对应鹅高尿酸症药物或饲料中的用途。

本发明的益处在于：

本发明选择球形节杆菌尿酸酶相比于其他物种的尿酸酶，具有水溶性好，单位酶活性高等优点，便于改造尿酸酶的生产。本发明即是通过同源肽段替换的方法对球形节杆菌尿酸酶进行改造，并进一步融合鹅源IgY Fc片段以获得本发明尿酸酶，与原始尿酸酶相比，对鹅的免疫原性显著降低，且在鹅体内的半衰期得到大大延长。此外，由于鹅属于经济动物，因此本发明相比现有技术具有更低的成本，低廉的价格适合市场推广使用。

附图说明