[发明专利]CEY17_RS11900基因突变体及其在制备L-缬氨酸中的应用

说明书

本发明公开了CEY17_RS11900基因突变体及其在制备L‑缬氨酸中的应用。具体地公开了CEY17_RS11900基因及其突变体CEY17_RS11900^{C260T，GC326‑327TA}(SEQ ID No.3)在构建产L‑缬氨酸的基因工程菌以及调控微生物L‑缬氨酸的产量中的应用。实验表明，对CEY17_RS11900基因编码区进行突变改造或在生产菌中过表达CEY17_RS11900基因或其突变基因，有助于L‑缬氨酸产量及转化率的提高。利用CEY17_RS11900基因及其变体构建产L‑缬氨酸的基因工程菌，可以培育符合工业化生产的高产高质量菌种。

技术领域

本发明属于微生物变异或遗传工程技术领域，具体涉及CEY17_RS11900基因突变体及其在制备L-缬氨酸中的应用。

背景技术

L-缬氨酸(L-Valine)，又称L-2-氨基-3-甲基丁酸(L-2-Amino-3-methylbutyricacid)，是支链氨基酸(Branched Chain Amino Acid，BCAA)中的一种，人和动物自身不能合成。L-缬氨酸是人体八种必需氨基酸之一，具有促进蛋白合成、抑制蛋白分解的作用，增强机体的免疫防护作用，有助于纠正因手术、创伤、感染等引起的负氮平衡。另外，L-缬氨酸还具有抗中枢疲劳的作用，抗外周疲劳作用，延缓运动性疲劳，加快运动后机体的修复，因此在食品和医药行业具有广泛的应用及商业价值。L-缬氨酸因其含有特殊的生理功能，市场需求量大，使得L-缬氨酸的生产备受关注。

目前，L-缬氨酸的生产方法主要有提取法、化学合成法、发酵法。提取法和化学合成法由于原料来源受限制、生产成本高、收率低，污染严重，难以实现工业化生产。微生物直接发酵法生产L-缬氨酸具有原料来源广泛，成本低、反应条件温和、容易实现大规模生产等优点，是一种非常经济、高效的生产方法。而工业发酵中获得高产的菌种，对于L-缬氨酸的发酵生产来说是至关重要的，是整个L-缬氨酸发酵工业的核心，是决定发酵产品工业价值的重要因素。随着L-缬氨酸的市场需求不断增加，选育高产、稳定的生产菌种，促进L-缬氨酸在微生物体内的积累，进一步提高L-缬氨酸的产量一直是L-缬氨酸发酵工业技术开发和发酵工程化研究的热点，对促进L-缬氨酸产业化的进程具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何通过基因的遗传改造提高微生物L-缬氨酸的产量，所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了蛋白质，名称为CEY17_RS11900^A87V，G109V，所述蛋白质可为下述任一种：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白质；

A2)将SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的具有相同功能的融合蛋白质。

本发明还提供了编码所述蛋白质CEY17_RS11900^A87V，G109V的核酸分子，名称为CEY17_RS11900^{C260T，GC326-327TA}。

进一步地，所述核酸分子CEY17_RS11900^{C260T，GC326-327TA}可为编码序列是SEQ IDNo.3所示的DNA分子或核苷酸序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子。

SEQ ID No.3所示的DNA分子也为本发明所述CEY17_RS11900^{C260T，GC326-327TA}基因。