[发明专利]用于检测生物污染物的组合物和方法

权利要求书

1.一种组合物，包含：

a)阳性扩增对照(PAC)质粒；

b)啮齿动物细小病毒特异性正向寡核苷酸引物；

c)啮齿动物细小病毒特异性寡核苷酸检测探针；

d)人工寡核苷酸检测探针；

e)啮齿动物细小病毒特异性反向寡核苷酸引物；

f)M13特异性正向寡核苷酸引物；

g)M13特异性寡核苷酸检测探针；

h)M13特异性反向寡核苷酸引物；和

i)缓冲剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中PAC质粒包含：(i)细小病毒核酸序列，(ii)M13K07核酸序列，和(iii)质粒特有的人工核酸序列。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述人工核酸序列包含17至20个核苷酸的序列，并且不超过7至10个连续的内部核苷酸和不超过6个连续的3’核苷酸与SEQ ID NO：9和12-37所示的任何细小病毒序列相同。

4.根据权利要求2所述的组合物，其中啮齿动物细小病毒特异性寡核苷酸引物和检测探针与细小病毒核酸序列杂交。

5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细小病毒核酸序列包含NS-1序列。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述NS-1序列选自：小鼠细小病毒原型株(MVMp)，小鼠细小病毒免疫抑制株(MVMi)，小鼠细小病毒Cutter株(MVMc)；小鼠细小病毒1b(MPV-1b)，小鼠细小病毒1a(MPV-1a)，小鼠细小病毒1c(MPV-1c)，仓鼠细小病毒(HaPV)，Toolan's细小病毒(H-1)，Kilham大鼠病毒(KRV)，大鼠细小病毒1a，大鼠细小病毒和大鼠病毒L的Umass株(RV-Umass)。

7.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细小病毒核酸序列与SEQ ID NO：12-37中任一个至少88％相同或与SEQ ID NO：9 97％相同。

8.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细小病毒核酸序列包含SEQ ID NO：9或12-37中的任一个。

9.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细小病毒核酸序列包含SEQ ID NO：37。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中b、c和e的寡核苷酸序列与SEQ ID NO：37杂交。

11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述PAC质粒包含SEQ ID NO：11的核酸序列。

12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人工核酸检测探针包含核苷酸序列，所述核苷酸序列在其3’末端具有与SEQ ID NO：9和12-37中任一个的序列相同的不超过五个连续核酸。

13.根据权利要求1所述的组合物，其中c、d和g的每个检测探针包含荧光团和淬灭剂，使得每个检测探针的荧光团发射不同波长的光。

14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人工寡核苷酸检测探针不识别任何天然存在的细小病毒或不与任何天然存在的细小病毒退火。

15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述人工寡核苷酸检测探针包含SEQ ID NO：10的序列。

16.根据权利要求2所述的组合物，其中M13K07核酸序列包含SEQ ID NO：8的序列。

17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述M13寡核苷酸引物和探针与SEQ ID NO：8的序列杂交。