[发明专利]一个具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体及其应用

说明书

本发明公开了一种具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A‑L479A突变体，所述的Ppmar1转座酶L477A‑L479A突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码所述Ppmar1转座酶L477A‑L479A突变体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。是将野生型Ppmar1转座酶477和479位置上的两个亮氨酸突变为两个丙氨酸。该Ppmar1转座酶L477A‑L479A突变体催化转座子转座的活性是野生型转座酶的活性的2.96倍，为利用MLE转座子开发基因标签奠定了基础，为后基因组时代大规模分离和标记基因，研究基因的功能提供了新工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体及其应用。

背景技术

转座子（transposon）是指在基因组上能从一个位点转移到另一个位点的一段DNA序列。自转座子被发现以来，随着人们在分子水平上对转座子结构和功能认识的不断深化，一些转座子已被改造为基因标签应用于基因分析，并逐渐成为大规模分离基因的重要手段之一。

Mariner-Like转座子（Mariner-Like Elements，MLE）是转座子中一个重要家族，最早是在研究毛里塔尼亚果蝇(Drosophila mauristiana) 白眼基因的一个不稳定突变时发现的。此后在其他动物以及植物基因组中也发现了大量MLE转座子的存在。与其它转座子相比较，MLE转座子具有结构简单、异源转座率高、在基因组插入位点接近随机等特点，在开发基因标签，分离基因，研究基因功能上，远远优于其他转座子。

MLE转座子由两端反向重复序列（Terminal Inverted Repeats，TIRs）和编码转座酶的基因组成，转座酶负责催化转座子转座，因此转座酶的活性是影响转座子的转座频率的主要因素。然而自然界分离的MLE转座酶由于在进化过程中 “垂直失活”效应积累了或多或少的突变，部分或全部丧失了催化转座能力，成为低活性或非活性的转座酶，严重影响了MLE转座子的应用，因此人工构建高活性的转座酶就显得十分重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体及其应用，解决了现有自然界分离的MLE转座酶催化活性较低或者不具备催化活性的问题。

本发明提供了一种具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体，所述的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种编码所述Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体的基因，编码所述Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种重组质粒，所述重组质粒携带有编码所述Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体的基因。

本发明还提供了一种工程菌株，所述工程菌株携带有上述重组质粒。

本发明还提供了一种具有高催化活性的Ppmar1转座酶L477A-L479A突变体在构建酵母突变体中的应用。