[发明专利]一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法

权利要求书

1.一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将活化的80％以上菌体形成芽孢的凝结芽孢杆菌转入无菌水中，使其浓度为5.0×10⁸cfu/ml～2.0×10⁹cfu/ml，形成种子培养液；

2)将种子培养液以3％～5％的接种量转接到一级液体培养基中进行一级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率200～350rpm，通气量0.8～0.9V/V·min，溶氧浓度80～90％，发酵时间为8～16h，制成一级发酵液；

3)将一级发酵液以10％的接种量转接到二级液体培养基中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率150～250rpm，通气量0.8～0.9V/V·min，溶氧浓度70～80％，发酵时间为12～30h，使凝结芽孢杆菌生长至对数生长末期，制成二级发酵液；

4)在无菌环境中，将二级发酵液以2％～4％的接种量接入麸皮固体培养基中，混合均匀，控制通风量为：换气3～10次/小时，温度30～40℃，湿度80％～90％条件下培养60～72h，培养期间翻动麸皮固体培养基，由此制备得到产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂；

其中，一级和二级液体培养基均含MnSO₄0.5～2.0g/L、MgSO₄0.4～1.0g/L、KH₂P0₄0.5～3g/L、K₂HP0₄0.5～3g/L、NaCl 3～10g/L、蛋白胨5～20g/L和牛肉膏3～10g/L，且pH为7.0±1.0；麸皮固体培养基由以下按质量份数计的原料混合配制而成：麸皮40～90份、鱼粉0.1～2份、硫酸铵0.1～0.6份、磷酸氢二钾0.1～0.6份、硫酸锰0.1～0.5份和水10～60份。

2.根据权利要求1所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤1)中，制备种子培养液的具体操作如下：首先将凝结芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基试管斜面，37℃下培养24h，然后接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基茄子瓶斜面，37℃下培养至80％以上菌体形成芽孢时，再转入无菌水中，使其形成浓度为5.0×10⁸cfu/ml～2.0×10⁹cfu/ml的种子培养液。

3.根据权利要求2所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨琼脂培养基含蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、NaCl 5g/L和琼脂15～20g/L，且pH为6.8～7.0。

4.根据权利要求1所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中，培养期间每隔3～5h翻动一次麸皮固体培养基。

5.根据权利要求1所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中，将制备得到的产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂经55～60℃真空干燥处理后，包装成成品，成品检测合格后，可作为微生物制剂产品。

6.根据权利要求1所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤2)和3)中，一级和二级液体培养基在接种前，于121℃条件下，灭菌20min。

7.根据权利要求1所述的一种产乳酸凝结芽孢杆菌微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中，麸皮固体培养基的配制方法为：将硫酸铵、硫酸氢二钾和硫酸锰先用水溶再与其余固体原料混合，搅拌均匀后，在压力、温度分别为1.05～1.3Kg/cm³、121～125℃的条件下，灭菌30～40min，冷却至40～50℃即得麸皮固体培养基，备用。