[发明专利]诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物及其筛选方法和应用

说明书

本发明公开了诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物，所述血清tsRNA标志物为tRF‑Ala‑AGC‑2‑M4。本发明还另外公开了诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物的筛选方法和应用，通过测序分析，对LN患者和健康对照组血清样本中差异表达的tsRNA进行筛选。本发明提供了一种tsRNA标志物tRF‑Ala‑AGC‑2‑M4，其在LN患者血清中高表达，并与LN的疾病活动度密切相关，具有辅助LN早期诊断和疾病监测的价值，亦为狼疮性肾炎方面tsRNA的深入研究奠定了基础；且检测时取样简单，灵敏度高，特异性强，有利于规模化临床应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物及其筛选方法和应用。

背景技术

肾脏是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)受累最严重的器官之一。大多数SLE患者在确诊5年内出现狼疮肾炎(LN)。10％的LN患者发展为终末期肾病(End stage renal disease，ESRD)，极大地加重了SLE患者的病情。显然，LN的早期诊断和及时治疗对预防疾病进展至关重要。

LN的临床诊断目前仍采用24h尿蛋白定量、血清肌酐、尿蛋白/肌酐比、尿沉渣镜检、肾小球滤过率、抗双链DNA抗体、补体等多项指标联合评估，然而这些指标的灵敏度和特异性不够，带来了明显的临床滞后性。当前，肾活检是诊断LN的金标准。但该检查为侵入性检查，不易多次重复检查，并且出血风险高的患者也不宜检查。24h尿蛋白定量是临床常用检查方法，但也有一些不足。例如尿液收集时间不准确，留存期间尿液易丢失，患者依从性差等。因此，寻找新的灵敏度和特异性更高的标志物是解决LN患者早期诊断并及时治疗的有效途径。

tsRNA是产生于成熟tRNA或其前体的一种非编码RNA分子，其片段长度为18-40nt。tsRNA具有来自tRNA的二级结构和表面修饰，其含有多种信息并在多种组织中稳定存在。tsRNA具有广泛的生物学作用，包括细胞和组织的应激反应、蛋白质翻译调控、肿瘤发生、干细胞生物学、核糖体生物合成、转座子调控、表观遗传调控、凋亡抑制、免疫反应等方面。其表达类型、丰度及修饰与性别、种族、组织细胞类型和疾病状态等相关。然而，在自身免疫性疾病领域，还没有用于早期诊断的tsRNA标志物，尤其是狼疮性肾炎方面的研究尚未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物及其筛选方法和应用，血清tsRNA的异常表达与LN的疾病活动程度密切相关，可以作为LN早期诊断或疾病监测的标志物；且为本发明方法筛选证实的可以用于LN诊断的tsRNA标志物，为LN标志物的研究提供了新的思路。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物，所述血清tsRNA标志物为tRF-Ala-AGC-2-M4，其序列为UCCCCGGCACCUCCACCA。

这里，tRF-Ala-AGC-2-M4为首个被证实的可用于诊断LN的tsRNA标志物，为狼疮性肾炎方面tsRNA的深入研究奠定了基础。

本发明还提供诊断狼疮性肾炎的血清tsRNA标志物的筛选方法，所述方法包括以下步骤：

1)对LN组和HC组血清标本进行测序，对测序数据进行均一化处理。选出差异倍数大于10，即Fold change10，并且P值小于0.05的tsRNA；删除重复、错配、表达丰度过低的tsRNA，进行聚类、GO和KEGG分析，最终选出10个显著高表达的tsRNA；

2)对选出的10个高表达的tsRNA用逆转录荧光定量聚合酶链式反应RT-qPCR进行标本测试，再对测试得到的tsRNA通过RT-qPCR进一步标本验证，即得到目标tsRNA 。