[发明专利]一种用于快速检测透明质酸的胶体金试纸条

说明书

本发明涉及免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种用于快速检测透明质酸的胶体金试纸条。以SEQ ID NO：1所示序列的蛋白为检测抗原，具体包括PVC胶板，于PVC胶板上依次连接样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，硝酸纤维素膜上设置有检测线与质控线，金标垫中含有胶体金颗粒标记的带有GST标签的透明质酸特异性结合蛋白，检测线中锚定有透明质酸，质控线中锚定有GST单克隆抗体，可特异性地结合带有GST标签的蛋白。本发明的胶体金试纸条，使用方便快速，能在10分钟内完成层析反应，实现对样品中透明质酸的快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种用于快速检测透明质酸的胶体金试纸条。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)是以葡萄糖、酵母粉、蛋白胨等为培养基，由马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)经发酵生产而成，是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基葡萄糖双糖单元构成的糖胺聚糖，是一种直链大分子多糖。由于透明质酸分子在空间结构上呈刚性螺旋柱形，柱内侧的羟基具有高度亲水性，同时，羟基的连续、定向排列，在透明质酸分子链上形成高度憎水区，即使在浓度很低时，透明质酸也可形成三维网状结构，所以透明质酸有很强的吸湿性、保水性和粘弹性，是良好的天然保湿因子，常用做化妆品成分。2021年1月7日，国家卫生健康委员会发文，批准透明质酸钠为“新食品原料”，可应用于普通食品添加。

结合蛋白是具有自主折叠和特异性识别复杂碳水化合物排列的蛋白，主要存在于识别多糖的蛋白质中。它以单个或多个域的形式存在于蛋白质的催化结构域的C端或者是N端，只具有结合能力不具有催化活性。多糖通常是较差的免疫原，相比于传统的抗体制备方法，多糖的特异性抗体获取困难。采用结合蛋白与HA结合，可以有效解决HA抗体缺乏的问题。

目前透明质酸常用的检测方法有HPLC法、比色法、CTAB比浊法和咔唑显色法。这类方法操作复杂，检测周期长，依赖专业设备和具有良好实验技能的检测人员，对于现场快速检测而言，这些方法就难以实现。

免疫学检测由于其特异性强、灵敏度高，近年来成为发展迅速的检测手段。胶体金试纸条因其检测周期短、易于储存，并且操作简便、结果简单清晰的优势，被广泛地应用于现场快速检测领域，目前市场上尚未出现可以用于HA快速检测的产品，故有必要研发一种适用于化妆品或食品中HA的胶体金检测试纸条以弥补空白，从而更好地指导企业进行生产质量控制与执法部门监管。

发明内容

本发明要解决的技术问题是目前透明质酸常用的检测方法有HPLC法、比色法、CTAB比浊法和咔唑显色法。这类方法操作复杂，检测周期长，依赖专业设备和具有良好实验技能的检测人员，对于样本量大的现场快速检测而言，这些方法就难以实现。

为解决上述问题，本发明提供一种检测透明质酸的胶体金免疫层析试纸条，使用了透明质酸特异性结合蛋白，使其应用于透明质酸检测时具备较高的特异性、重复性和准确性。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：一种快速检测透明质酸的胶体金免疫层析试纸条，其以SEQ ID NO：1所示序列的蛋白为检测抗原。

SEQ ID NO.1

EETTTNLVKNGDFTTTTKTSGAWSGQAAKDWETWVPGNVKKENGKVTVDNGRLHISSTDTYRVAVHQTVDVDPSKKYLLGYDVETKDLKGSGVRVRLHGLTAEGKDLEPKEFIHTPFKNGSKKERVEQVLTVSPQTRKLKVELFFENSIGQAWLDNVSLVEHIEKVPETPEQKPEPAQPES

进一步的，编码上述透明质酸结合蛋白的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2或可翻译出SEQ ID NO.1的所有基因。

SEQ ID NO.2