[发明专利]甜菊双糖苷在CIK细胞培养中应用

说明书

本发明公开了甜菊双糖苷在CIK细胞培养中应用。本发明发现，甜菊双糖苷可以促进CIK细胞增殖并提高其对肿瘤细胞的杀伤力，因而甜菊双糖苷可以用于CIK细胞体外培养，制备相应的专属培养基。

技术领域

本发明涉及免疫细胞培养领域，具体涉及甜菊双糖苷在CIK细胞培养中应用。

背景技术

肿瘤是人体内正常的体细胞发生基因突变而导致恶性增殖的产物。某些肿瘤难以治疗，主要是因为它与正常细胞非常相似，其具备逃避机体免疫识别和攻击的能力，这种能力就是“免疫逃逸机制”，通过这种机制能有效躲过机体免疫系统的监控和清除。而肿瘤免疫治疗采用过继T细胞转移技术，将体外扩增和激活的免疫细胞转移到患者体内以杀死肿瘤细胞。该方法已成为当前癌症治疗的重要组成部分，目前各种类型的免疫细胞都已陆续被用于临床试验，包括自然杀伤细胞(NK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)和细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)等，其中CIK细胞被认为是肿瘤免疫疗法的理想候选细胞类型。

CIK细胞的增殖活性和杀伤力对基于CIK细胞的肿瘤免疫疗法效果至关重要。

发明内容

本发明的目的是为了提供甜菊双糖苷在CIK细胞培养中应用。

实现上述目的的技术方案如下：

甜菊双糖苷在CIK细胞体外培养提高其增殖活性和杀伤力中的应用。

甜菊双糖苷在制备提高CIK细胞增殖活性和杀伤力的培养基中的应用。

有益效果：

本发明发现，甜菊双糖苷可以促进CIK细胞增殖并提高其对肿瘤细胞的杀伤力，因而甜菊双糖苷可以用于CIK细胞体外培养，制备相应的专属培养基。

附图说明

图1为CIK细胞表面CD3和CD56的染色鉴定结果。

图2为各组吸光度值。

图3为各组效应细胞对靶细胞的杀伤力。

具体实施方式

一、试验材料

胎牛血清、RPMI-1640培养基为Gibco产品。

重组人IFN-γ购自上海西格生物科技有限公司，重组人IL-2购自武汉菲恩生物科技有限公司，人抗CD3单抗购自上海康朗生物科技有限公司。

甜菊双糖苷购自上海信裕生物科技有限公司，HPLC≥98％。

CCK8试剂盒为同仁化学产品。

胃癌SGC-7901细胞的培养：将胃癌SGC-7901细胞用含有10％胎牛血清RPMI-1640培养基在37℃、5％CO₂、饱和湿度培养，观察细胞生长情况并及时换液(2～3d)和传代。

二、试验方法

1、CIK细胞培养和鉴定

采用常规方法从外周血中分离培养CIK细胞，具体步骤为：健康成人外周血经Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，37℃、5％CO₂ RPMI-1640培养基中培养4h后收集悬浮细胞，重悬，然后放入75cm²型培养瓶中，于37℃、5％CO₂的培养环境中培养，0d时加入1000U/mL IFN-γ，24h后加入500U/mL IL-2和500ng/mL抗CD3单抗继续培养。细胞生长的同时补入新鲜培养基和IL-2(500U/mL IL-2)。收集第0d和14d细胞，鉴定细胞表面CD3和CD56。具体鉴定方法：先收集细胞，制作细胞蜡块，脱蜡，水化，抗原修复，封闭；然后按CD3和CD56抗体说明书将抗体稀释至适宜浓度，再用一抗、二抗孵育，DAB显色，苏木素染色，分化，蓝化，脱水，封片；最后在显微镜下观察CIK细胞表面CD3和CD56的表达量。