[发明专利]一种小鼠胚胎干细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种小鼠胚胎干细胞株SXMUe002‑A‑1，其保藏编号为CGMCC No：23035，于2021年9月28日保藏于国家典型培养物保藏中心。本发明还提供了小鼠胚胎干细胞株SXMUe002‑A‑1在制备小鼠血友病模型中的应用。本发明获得的突变细胞株SXMUe002‑A‑1该突变株的生长繁殖能力及细胞形态与野生型高度相似，其在外显子上没有碱基的缺失及插入，仅仅突变了一个碱基，更接近临床病例。所述突变细胞株SXMUe002‑A‑1具有小鼠胚胎干细胞的特性，还可以进行小鼠胚胎干细胞嵌合注射得到血友病小鼠模型，对于进一步进行血友病无义突变的机制研究、血友病的药物筛选及基因治疗有重大意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种鼠胚胎干细胞及其制备方法和应用。

背景技术

血友病是一种X染色体连锁隐性遗传性出血性疾病。F8基因缺陷导致血友病A(hemophilia A，HA)，F9基因缺陷导致血友病B(hemophilia B，HB)，在男性人群中，发病率分别为1/5,000及1/25,000(杨仁池.血友病诊断与治疗中国专家共识(2017年版)[J].中华血液学杂志,2017,38(05):364-370)。中国是一个人口大国，预计有80,000–120,000血友病患者，其中约50％为重型。血友病现有的治疗手段仍以凝血因子制品输注的替代治疗为主，对家庭和社会造成极大负担^[2]。此外，长期输注凝血因子导致抑制物的产生使得替代治疗疗效降低甚至无效，研究显示无义突变是凝血因子抑制物产生的高危因素^[3]。故针对无义突变所致的血友病，探索新的廉价的个性化治疗方法并揭示其分子机制具有重要的意义。由于血友病是单基因遗传病,因此对于血友病,基因治疗应该是最理想的方式。而小鼠模型的我们研究各种疾病的良好模型，包括血友病。

CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展为我们构建疾病模型提供了方便，它可以精准的实现目的基因的改造。以往的血友病小鼠模型是敲除F8/F9基因而导致凝血因子合成障碍，但血友病的基因突变种类繁多，这种敲除小鼠模型不能够很好反应血友病具体的基因突变情况。这就需要构建更符合病例条件下的基因突变类型。

山西医科大学第二医院筛查出一个带有无义突变的血友病B患者(F9.223C ＞T)，Factor IX Gene(F9)Variant Database(http://www.factorix.org/)显示3713 个个案报告中有1094种F9变体，其中无义突变有87种，约占8％。F9 C.223C ＞T有73个患者报导，中国有7例，其中中国大陆5例，中国台湾2例。另一个数据库(https://omim.org/)显示有几千种无义突变与疾病有关。为了更深入研究血友病及无义突变的发病机制及治疗，我们在前期的研究基础中，进一步利用 CRISPR/Cas9技术在小鼠胚胎干细胞上构建到了一株无义突变的(F9 c.223C＞ T)小鼠胚胎干细胞模型。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供一种小鼠胚胎干细胞株SXMUe002-A-1。

包括如下技术方案：

一种小鼠胚胎干细胞株SXMUe002-A-1，其保藏编号为CGMCC No：23035，于2021年9月28日保藏于国家典型培养物保藏中心。

所述小鼠胚胎干细胞株具有F9基因发生c.223C＞T无义突变。

本发明的第二目的是提供所述小鼠胚胎干细胞株SXMUe002-A-1在制备小鼠血友病细胞模型中的应用

本发明的第三目的是提供一种小鼠血友病模型，其通过嵌合注射上述的小鼠胚胎干细胞株SXMUe002-A-1而制备得到。

本发明的第四目的是提供上述的小鼠胚胎干细胞株SXMUe002-A-1或上述小鼠血友病模型的应用。