[发明专利]一种新型冠状病毒S蛋白的表达方法

说明书

本发明涉及一种新型冠状病毒S蛋白的表达方法，包括以下步骤：A、PCR扩增；B、将步骤A得到的扩增产物进行电泳纯化后与制粒连接；C、将重组质粒热激转化BL21(DE3)大肠杆菌；D、配置培养基；E、将重组大肠杆菌的种子液按照3%接种量接种到培养基中培养；F、诱导表达蛋白，然后离心收集菌体，并使用超声波进行菌体破碎，然后使用洗脱纯化得到新型冠状病毒S蛋白。本发明提高了新型冠状病毒S蛋白表达的效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是一种新型冠状病毒S蛋白的表达方法。

背景技术

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是引发新型冠状病毒肺炎的病原体。其中，新型冠状病毒的S蛋白通过不同的受体结合结构域与宿主细胞结合，是宿主中和抗体重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。如何高效大规模生产新型冠状病毒S蛋白成为了本领域的研究热点之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新型冠状病毒S蛋白的表达方法，提高了新型冠状病毒S蛋白表达的效率，本发明所采取的技术方案如下。

一种新型冠状病毒S蛋白，其由SEQ ID NO.1的氨基酸序列表示。

一种SEQ ID NO.1的氨基酸序列表示的新型冠状病毒S蛋白的编码基因，其由SEQID NO.2的核苷酸序列表示。

一种SEQ ID NO.2的核苷酸序列表示的编码基因的上游引物，其由SEQ ID NO.3的核苷酸序列表示。

一种SEQ ID NO.2的核苷酸序列表示的编码基因的下游引物，其由SEQ ID NO.4的核苷酸序列表示。

一种重组质粒，其包括SEQ ID NO.2的核苷酸序列所表示的编码基因。

一种重组大肠杆菌，其包含有SEQ ID NO.2的核苷酸序列所表示的编码基因。

一种上述新型冠状病毒S蛋白的表达方法，包括以下步骤：

A、PCR扩增；50μL反应体系中，加入1.5μL的由SEQ ID NO.2的核苷酸序列表示的新型冠状病毒S蛋白编码基因，50 μmol/L的由SEQ ID NO.3的核苷酸序列表示的上游引物1μL，50 μmol/L的由SEQ ID NO.4的核苷酸序列表示的下游引物1μL，1μL的15mmol/L的dNTP，5×缓冲液 10μL，pfu DNA聚合酶 0.5μL，其余用双蒸水补齐，PCR反应条件为94℃预变性5分钟，94℃变性40s，56℃退火45s，72℃延伸65s，共45个循环；

B、将步骤A得到的扩增产物进行电泳纯化，将纯化后的新型冠状病毒S蛋白编码基因和pPIC9质粒分别进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，然后使用T4 DNA连接酶连接，得到重组质粒；

C、将重组质粒热激转化BL21(DE3)大肠杆菌，然后使用80μg/mL卡那霉素LB培养板进行筛选，得到重组大肠杆菌；

D、配置培养基；培养基的成分为，

葡萄糖 6.5 g/L、甘油 12g/L、D-山梨醇 10 g/L、蛋白胨 5 g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、氯化铵 5g/L、硫酸镁 5 g/L、硫酸亚铁1.5 g/L、柠檬酸钠 2.0 g/L、酵母粉 1g/L、三甲基甘氨酸 3.0 g/L；

培养基的pH值为7.3；

E、将重组大肠杆菌的种子液按照3%接种量接种到培养基中，培养温度为35～36℃，pH值维持在7.3～7.5，培养3小时；

F、加入诱导剂IPTG至终浓度为0.5 mmol/L，诱导表达蛋白，然后离心收集菌体，并使用超声波进行菌体破碎，然后使用洗脱纯化得到新型冠状病毒S蛋白。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明可实现高效率的新型冠状病毒S蛋白表达，在大规模量产条件下新型冠状病毒S蛋白表达水平可达311.24mg/L,便于对于新型冠状病毒的研究和相关疫苗的后续研发。