[发明专利]一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法在审
| 申请号： | 202210163415.5 | 申请日： | 2022-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN114854786A | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 孟德璇;金危危;罗海山;黄伟;董小妹;朱敏;杜万里;钟雪梅 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/29;C12N15/65;A01H1/02;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 朱芳 |
| 地址： | 110866 辽宁省沈阳市*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 基因工程 改造 cenh3 蛋白 提高 玉米 单倍体 诱导 方法 | ||
1.一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤一，将玉米CENH3基因中N末端的序列替换为玉米H3基因的N末端序列，得初步改造基因1，再将基因1克隆到以Ubiquitin为启动子，且含有大分子量标签的植物过表达载体pCAMBIA3301-RFP中，构建形成过表达着丝粒特异融合蛋白的载体UBI:M-tailswap-RFP，将该过表达载体转化到玉米受体中，得阳性转化株系LH244M-tailswap-RFP；
步骤二，将所述阳性转化株系与玉米受体亲本CAU5进行杂交，得到杂交1代，随后继续以CAU5为轮回亲本回交2代，接着再自交至少4代，最后形成具有高诱导率的新型诱导系。
2.根据权利要求1所述一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述步骤一中，大分子量标签为RFP荧光蛋白。
3.根据权利要求1所述一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述步骤一中，着丝粒特异融合蛋白具体为将玉米着丝粒特异组蛋白CENH3的N端氨基酸序列替换为玉米核小体组蛋白H3的N端氨基酸序列，并在CENH3蛋白的C端连接上大分子量荧光标签RFP的融合表达蛋白。
4.根据权利要求1所述一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述步骤一中，转化采用的是农杆菌浸胚法。
5.根据权利要求1所述一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述步骤一中，玉米受体株系采用的是LH244株系。
6.根据权利要求1所述一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述步骤二中，受体亲本玉米为Stock6来源的玉米单倍体诱导系CAU5。
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