[发明专利]含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用，属于疫苗领域。本发明公开的疫苗活性成分为重组蛋白，所述重组蛋白由融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher和Cap‑SpyTag连接而成，所述融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher是氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；所述融合蛋白Cap‑SpyTag为氨基酸序列是SEQ ID No.3的蛋白质。本发明还提供了在CHO细胞株中共表达猪瘟E2的构建方法，利用圆环VLPs展示E2，达到E2 VLPs化，可以提高E2抗原免疫原性，达到相互刺激免疫，提高猪瘟和圆环免疫保护效果。

技术领域

本发明属于疫苗领域，具体涉及含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒(Classical swinefever virus，CSFV)引起的一种急性、发热、接触性传染病，具有高度传染性和致死性。猪是该病毒唯一的自然宿主。CSFV为有囊膜病毒，40-60 nm，单股正链RNA。CSFV基因组长约123kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)，此ORF翻译成含3898个氨基酸残基、分子量约438 kDa的多聚蛋白，并进一步在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为成熟蛋白。CSFV的所有结构蛋白和非结构蛋白均由该ORF所编码，ORF两侧是5′ 端非翻译区(5′ UTR)和3′端非翻译区(3′ UTR)，且5′ 端无帽子结构，3′端无poly(A)尾巴。这一大前体蛋白以共翻译和后翻译的形式在细胞蛋白酶和病毒特异蛋白酶作用下加工成结构蛋白和非结构蛋白，其结构蛋白和非结构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为Npro、c、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。NS2-3可被加工成NS2、NS3(P80)，除c、E0、E1和E2为结构蛋白外，其余均为非结构蛋白。在结构蛋白中，最具有免疫防制研究价值的是E0和E2，尤其是E2蛋白是目前亚单位疫苗首选蛋白。

E2蛋白又称为gp55，为CSFV的囊膜糖蛋白，是病毒主要的抗原蛋白，也是三个病毒糖蛋白中保守性最低、最易变异的分子。gp55常以2种形式存在于病毒粒子及CSFV感染的细胞表面：一是形成100 kDa的同源二聚体，二是与gp33形成75 kDa的异源二聚体。在体外，E2可诱导产生病毒的中和抗体，在体内可诱导产生抗CSFV的攻击抗体。用E2双相油包水乳剂免疫猪，能抵抗100 LD50 CSFV Brescia毒株强毒的攻击。E2的蛋白骨架由371个氨基酸(ORF编码的690-1060氨基酸残基)组成，并以其C端的40个疏水氨基酸锚定在膜上。由于糖基化程度不同，E2的分子量可为51～58 kDa。E2分子内的15个半胱氨酸(Cys)残基在属内均保守，其中N端6个Cys残基参与抗原结构域的形成，C端9个Cys残基则参与同源、异源二聚体的形成。

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科圆环病毒属，病毒粒子大小为14-25nm，平均直径17 nm，呈对称的二十面体，无囊膜，基因组为单股环状DNA，由脱氧核糖核酸组成，在组织中的悬浮密度为1.37 cm³。猪圆环病毒2型(PCV-2) 是仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸病综合征（PRDC）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）的重要病原，还可引起多种肠炎病、仔猪先天性震颤（仔猪抖抖病）、母猪繁殖障碍等疾病，猪圆环病毒2型ORF2基因编码病毒的核衣壳蛋白(Cap)属于病毒保护性抗原，具有重要免疫功能。