[发明专利]一种用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的引物、探针；其特征在于，所述引物、探针包括六对，即通过对HCMV、EBV、HHV6、HHV8、BKV、JCV的核酸序列进行比对分析，根据引物探针设计的基本原则，分别选择无二级结构且高度保守的区段，利用引物分析软件和人工判断，并经多次实验优化后确定适合实时荧光定量Real Time-PCR(RT-PCR或qPCR)的多对引物和探针。

2.根据权利要求1所述的用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的引物、探针，其特征在于，

所述HCMV正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物5'-GCTTTACGGTGTTGTGTC-3'

反向引物5'-TGCATAAAGAGCTTGCC-3'

寡核苷酸探针：5'-FAM-ATGAAGGGTTGCGG-MGB NFQ-3'

所述EBV正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物：5'-AATCTTCTTCATAGCCTGAGACG-3'

反向引物：5'-AACTACCCGCAATGAAATGGAA-3'

寡核苷酸探针：5'-Fam-AAGGTTCGGAAATCTGT-BHQ-3'

所述HHV6正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物：5'-TCGATCATCCTCAACCTAGC-3'

反向引物：5'-CGCTCCTGGATAATTTGGCTTTG-3'

寡核苷酸探针：5'-Fam-ATTCCTTCGGGTGTGACGTCTGGTG-BHQ-3'

所述HHV8正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物：5'-TGGGGCACGCTATTCTG-3'

反向引物：5'-GAACACGATGTCAAATCCGTTG-3'

寡核苷酸探针：5'-Fam-GGCACGACCATGG-MGB NFQ-3'

所述BKV正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物：5'-TGTTGAGTGTTGAGAATCTGCTGTT-3'

反向引物：5'-TGATCTACACCAGTTTCTTAGTCAAGCT-3'

寡核苷酸探针：BK/JC Probe

所述JCV正向、反向引物和荧光探针序列分别是：

正向引物：5'-AGAGTGTTGGGATCCTGTGTTTTC-3'

反向引物：5'-GCATTCCTCAGTCAAGCTGTGT-3'

寡核苷酸探针：BK/JC Probe

上述六对荧光探针分别在5'端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的引物、探针，其特征在于所述BK/JC Probe为：

5'-Fam-AAAGGTAGAAGACCCTAAAG-MGB NFQ-3'。

4.根据权利要求2所述的用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的引物、探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM；所述荧光淬灭基团为BHQ，也可以根据特殊的荧光报告基团选择相对应的荧光淬灭基团进行不同方式的多种组合以适应众多厂家多通道荧光PCR仪器的不同需求，如荧光报告基团可以选择FAM、VIC、CY3、ROX、CY5、TET、HEX、JOE等；淬灭基团选择与荧光基团相对应的淬灭基团如BHQ系列、TAMRA、DABCYL等。

5.一种用于器官移植前后多重病毒快速筛查和定量检测的试剂盒，其特征在于，试剂盒包括HCMV、EBV、HHV6、HHV8、BKV、JCV反应混合液、DNA人工内标(BIOLINE BIO-35029)、阳性质控品、阴性质控品；其中所述RT-PCR反应液含有内标探针和如权利要求1至4任一所述的荧光RT-PCR引物和荧光探针。